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植物分子生物学实验技术 班 级：研 122 班 专 业：作物生物技术 姓 名：陕建国 学 号： 授课教师：李红英老师 精选文库 实验一：植物 DNA和 RNA提取方法的讨论 一、提取植物 DNA和 RNA的用处 提取植物组织的 DNA和 RNA，分析其序列，了解序列的排列顺序可以更好的从分子水 平上进行研究，从分子水平上改良植物或者说农作物的一些性状、品质等。 （一）提取植物 DNA的用处 DNA的提取在植物基因工程以及植物分子生物学研究中占有重要地位， DNA 的提取效 率直接决定着后续实验的成败。另外，提取植物 DNA在分子育种方面也有很重要的用处。 （二）提取植物 RNA的用处 提取 RNA可以进行 Northern 杂交、原位杂交、 RT-PCR以及 cDNA 文库构建等很多 分子生物学实验。提取 RNA也是进行基因表达分析及基因克隆等分子生物学研究的基础。 二、植物组织 DNA的提取方法 提取植物 DNA的试验原理： 脱氧核糖核酸（ deoxyribonucleicacid ，DNA）是一切生物细胞的重要组成成分，主 要存在于细胞核中，盐溶法是提取 DNA的常规技术之一。从细胞中分离得到的 DNA是与蛋 白质结合的 DNA，其中还含有大量 RNA，即核糖核蛋白。如何有效地将这两种核蛋白分开 是技术的关键。DNA不溶于 0.14mol/L 的 NaCl 溶液中，而 RNA则能溶于 0.14mol/L 的 NaCl 溶液之中，利用这一性质就可以将二者从破碎细胞浆液中分开。制备过程中，细胞破碎的 同时就有 Dnase释放到提取液中，使 DNA因被降解而影响得率，在提取缓冲液中加入适量 的柠檬酸盐和 EDTA，既可抑制酶的活性又可使蛋白质变性而与核酸分离， 再加入阴离子去 垢剂 0.15 ％的 SDS，经过 2h 搅拌，或用氯仿－异醇除去蛋白，通过离心使蛋白质沉淀而 除去，得到的是含有核酸的上清液。 然后用 95％的预冷乙醇即可把 DNA从除去蛋白质的提 取液中沉淀出来。 （一）植物 DNA的 SDS提取法： （来自You are so late 的新浪空间） 试验试剂： 1、研磨缓冲液：称取 59.63gNaCl ，13.25g 柠檬酸三钠， 37.2gEDTA－Na 分别溶解后合并 为一，用 0.2mol/L 的 NaOH调至 pH7.0，并定容至 1000ml。 2、10×SSC溶液：称取 87.66gNaCl 和 44.12g 柠檬酸三钠， 分别溶解，一起定容至 1000ml。 3、1×SSC溶液：用 10×SSC溶液稀释 10 倍。 4 、0.1 ×SSC溶液：用 1×SSC溶液稀释 10 倍。 5、Rnase溶液：用 0.14mol/LNaCl 溶液配制成 25mg/ml 的酶液，用 1mol/L HCl，pH至 5.0 ， 使用前经 80℃水浴处理 5min （以破坏可能存在的 Dnase）。 6 氯仿－异戊醇：按 24ml 氯仿和 1ml 异戊醇混合。 7、 5mol/L 高氯酸钠溶液：称取 NaClO4．H2O70.23g ，先加入少量蒸馏水溶解再容至 100ml。 8、SDS（十二烷基硫酸钠）化学试剂的重结晶：将 SDS放入无水酒精中达到饱和为止，然 后