兽医生物制品灭活剂佐剂及保护剂.pptVIP

第四章兽医生物制品的 灭活剂、佐剂及保护剂 云南农业大学动物科学技术学院 孙永科博士  【知识目标】 熟悉兽医生物制品生产中常用的灭活剂、佐剂及保护剂 今理解灭活剂、佐剂及保护剂在兽医生物制品生产中的作用; 掌握 灭活剂、佐剂、保护剂的概念; 影响灭活剂作用的因素; 影响保护剂效能的因素。 了解 ÷佐剂的基本要求及类型 ÷保护剂的组成、效能。 【能力目标】 能进行白油佐剂的乳化  第一节灭活与灭活剂 为了提高兽医生物制品的安全性、防止 散毒,许多疫苗通常通过灭活制成无毒力和 无感染性的制品,灭活乃是兽医生物制品中 的一项基本技术。  灭活及灭活剂的概念 灭活( inanimation)是指破坏微生物的生物学活性、繁殖能 力及致病性,但尽可能不影响其免疫原性,用以制备灭活疫 苗。广义的灭活尚包含灭能 inactivation),即使一些活性物 质(微生物及其代谢产物、激素、酶、血清因子和抗体等)丧 失活力的过程。各种灭活疫苗、诊断抗原等的制造过程均属 于灭活;血清经56℃C加热30mn处理,使补体丧失活性、破 坏一些抑制因子的过程,以及破伤风毒素经甲醛处理后即失 去致病性成为类毒素的过程均为灭能。用来灭活的药物称为 灭活剂( inactivator),又称化学灭活剂。化学灭活是制备 灭活苗最重要的手段。  二、灭活的类型 按照灭活作用的性质可将灭活分为物理灭活 和化学灭活两类,尤以化学灭活法效果确实、 方法简便而最为常用。对不同的微生物、活 性物质所采用的灭活方法、灭活剂也不尽相 同。因此,选择合适的灭活剂和灭活方法对 研制灭活兽医生物制品十分重要  (-)物理灭活 般常用热灭活、超声波灭活、紫外线灭活和7射线灭活等 方法杀死微生物或消除其毒性。 令热灭活最早由 Smith等研制猪霍乱灭活菌苗时提出,后来 发现热灭活容易发生菌体蛋白质变性。过去用加热灭活方法 者较多。该法简单易行,但加热杀死微生物的方法比较粗糙, 容易造成菌体蛋白质变性,因而免疫原性受到明显影响。超 卢波裂解细胞灭活应放在冰浴中间断进行。紫外线灭活效果 不够好,曾发生过经紫外线灭活的强毒重新活化的例子。Y 射线灭活应根据被照射物的容量大小选择照射距离和照射强 度 目前,除诊断抗原尚采用物理灭活(主要是热灭活)外, 般很少使用。  (二)化学灭活 利用化学药品或酶使微生物、活性物质的 一些结构发生改变,从而丧失生命力、感染 性、毒性或活性。化学灭活法是目前采用最 多的灭活法,但化学灭活的效能常受灭活剂 种类、剂量和作用温度、pH、时间等因素影 响,因此必须筛选最佳的灭活条件 令在特定条件下,物理灭活与化学灭活也可 联合用于某些生物制品的灭活。  三、常用灭活剂 令早在1911年, Lowenstein和 Eisler就用甲醛处理 破伤风毒素,使之脱毒而成类毒素。以后, Puntonii(1924)以0.1%苯酚或0.1%甲醛处理制成犬 瘟热灭活苗,D0se等(91986)用结紫灭活猪 瘟病毒制成猪瘟结晶紫疫苗。至20世纪80年代,随 着化学灭活剂研究的快速发展,已筛选出不少效果 优良的灭活剂。  (-)甲醛 我国卫生部1979年颁发的《生物制品规程》中所列的灭活疫 苗共16种,其中用甲醛灭活的疫苗占81%;农牧渔业部 1984年发布的《兽医生物制品制造及检验规程》中的20种 灭活疫苗,以甲醛灭活者达17种,占85%。农业部2000年 发布的《兽医生物制品制造及检验规程》中的26种灭活疫苗, 均以甲醛作为灭活剂。 令甲醛的灭活机制是还原作用,低浓度时能破坏微生物的生命 链,从而丧失活力或毒性而保存抗原性;高浓度时与微生物蛋 自质(含酶蛋白)的氨基结合形成另一种化合物,从而破坏、 杀死微生物。  (-)甲醛 令甲醛用于疫苗灭活的浓度为0.1%~0.8%。一般需氧细菌用 0.1%~0.2%的浓度,厌氧菌则多用0.4%~0.5%的甲醛杀 菌或脱毒。37~39℃处理24h以上,有的需要更长时间。例 如猪肺疫灭活苗,用0.1%的甲醛溶液,37~38°℃C灭活7~12 h;气肿疽灭活苗,用0.5%的甲醛液,37~38℃C灭活72 96h而破伤风类毒素用0.4%甲醛液,37~38℃灭活21~23 d。甲醛用于病毒灭活其浓度可在0.05%~0.4%,大部分使 用0.1%~0.3%。不论是杀菌或脱毒,使用甲醛或其他灭活 剂,灭活剂的浓度及处理时间都要根据实验的结果来确定 通常以用量小(浓度低)、杀菌处理时间短而又能达到彻底灭 活目的为原则。为了中止在灭活结束后的作用,要用焦亚硫 酸钠阻断。