分子印迹聚合物简介.pptxVIP

分子印迹聚合物简介;主要内容;一、分子印迹基础知识;2 、分子印迹技术基本原理 分子印迹就是将模板分子与功能单体通过共价、非共价或金属协同作用形成预聚合物，在交联剂的作用下功能单体发生聚合，将模板分子固定在聚合物中，最后脱除模板分子，即聚合物材料上留下与模板分子在大小、形状和官能团的方向上都互补的空穴结构。空穴不仅保留了与模板分子化学结构互补的官能团的有序排列，也维持了它的整个空间构象，所以当材料再次遇到模板分子时，可发生特异性的结合。 ;3、分子印迹聚合物制备方法; Qin等以溶菌酶为模板蛋白，N-异丙基丙烯酰胺、丙烯酰胺和VBIDA为功能单体，用冷冻聚合法制得印迹溶菌酶的热敏大孔水凝胶。这种智能水凝胶对模板蛋白表现出很强的吸附能力，印迹因子可达7.87，并在多种蛋白的混合溶液中对模板蛋白实现成功分离。 ; Brown等用溶胶-凝胶法制备无定形聚硅氧烷印迹材料，用无定形硅印迹溶菌酶多肽序列（16-residue peptide lysozyme C,1.8 kDa)识别位点实际就相当于识别整个分子，与传统的有机材料相比，首先小段多肽与单体材料有更强和更具特异性的相互作用，以此减少非特异性吸附并增强材料对模板的亲和力，其次，小段多肽在有机试剂中相对稳定，因而其有机试剂也可作为聚合的介质对模板蛋白结合力强，选择性好，蛋白进出材料骨架速度快，此种方法相当于抗原决定基法。; 整体印迹法工艺虽然简单，但后续处理复杂耗时，所得材料需经研磨和过筛才能得到所需粒径范围的颗粒，并不适合工业化生产。另外，此种方式制得的材料外形不规则，限制了其在色谱和固相萃取领域的应用。最重要的是，整体聚合时不可避免地会有大量的印迹位点分布于材料内部，不利于蛋白质的进出。;3.2 表面印迹 在聚合物的表面或近表面构造模板蛋白的结合位点称为“表面印迹”。与整体印迹旨在构造蛋白特异性三维结构不同的是，表面印迹的特点是在材料的表面构建蛋白的“二维印迹”。这样的二维阴极材料从某种程度上解决了生物大分子难以进出聚合物材料的问题，可大大缩短蛋白扩散进入材料并达到平衡的???间。然而，与“三维印迹”材料性比，“二维印迹”材料可能会出现对模板蛋白选择性降低的问题。; El kirat 等首先对玻璃板进行硅烷化，用双功能交联剂将模板蛋白接枝与其上，继而在表面进行单体材料丙烯酰胺的聚合，由此制得二维结构印迹材料。该研究小组首次用AFM对材料进行表征。AFM对材料表面的局部图像显示，印迹薄膜上分布有许多与模板蛋白大小形状互补的小孔穴，而非印迹薄膜图像模糊，无明显凹痕。小组以细胞色素c为模板，并将模板蛋白细胞色素c共价结合与AFM的探针上，借助力-距离曲线探测出其在纳米尺度的范围内与印迹材料的特异性结合力在85~95pN之间。将非模板蛋白牛血清白蛋白共价结合与探针上作为对照，结果发现探针与印迹材料没有特异性相互作用。将连接了模板单板的探针与非印迹材料相互作用也得到同样地结果。证明模板与印迹位点具有特异性亲和力。; Su等选用甲基丙烯酸为功能单体，聚乙二醇400二甲基丙烯酸酯为交联剂，用微接触印迹法制备了卵清蛋白印迹薄膜。印迹薄膜的AFM图像显示，材料上分布有直径约34nm的空穴，材料经蛋白重结合后图像表明卵清蛋白以直径为32~36nm的蛋白簇形式重结合与表面的空穴中。; Li 等将高度交联的壳聚糖微球作为“核”通过可逆的席夫碱反应共价连接模板蛋白BSA，最后在此多糖-蛋白的界面上通过溶胶-凝胶过程覆盖一层聚硅氧烷的“壳”。用乙二酸破坏席夫碱从而将模板蛋白从“核”上脱除，而“壳”上则将模板的大小、形状及空间构象保留下来。此法制备的微球表面具有较粗糙的多孔结构。扫描电镜图像显示，印迹微球表面形成大量分布均匀、网状连接的空穴。BET氮气吸附试验结果表明，作为支撑基质的壳聚糖微球BET表面积为41.25m2·g-1平均孔径为8.7 nm。而“核-壳”型印迹微球的BET 表面积为48.65 m2·g-1,平均孔径达43.2 nm。表面积和孔径的增加提示了印迹位点的形成。 ; Tan 等以甲基丙烯酸甲酯为功能单体, 乙二醇二甲基丙烯酸为交联剂, 用微乳液 (W/O/W 复乳)聚合法制备了印迹RNase A 的纳米粒。该法中使用了较高浓度的SDS 和聚乙烯醇作为乳化剂。作者认为, 当两亲性的蛋白被加入预聚合微乳液后, 蛋白会吸附于表面活性剂形成的胶束中并被分配到油-水两相的界面上。聚合反应引发后,蛋白便被“束缚”在胶束的表面了。研究表明, 蛋白和表面活性剂的相互作用有助于蛋白停留在纳米粒表面, 然而太剧烈的作用却会导致蛋白明显的构象变化, 甚至变性, 造成错误的印迹。;二 文献介绍;1、印迹聚合物对不同蛋白质