乳酸脱氢酶(LDH)法操作说明复习进程.docx

LDH法细胞毒性检测: 原理：乳酸脱氢酶在胞浆内含量丰富，正常时不能通过细胞膜，当细胞受损或死亡时可释放到细 胞外，所以细胞死亡数目与细胞培养上清中 LDH活性成正比，用比色法测定实验孔LDH活性,并与靶 细胞对照孔进行比较，可计算效应细胞对靶细胞的杀伤百分率 LDH （乳酸脱氢酶）是一种极为稳定的细胞质酶，存在于正常细胞的胞质中，一旦细胞膜受损，LDH 即被释放到细胞外； LDH催化乳酸形成丙酮酸盐，和 INT （四唑盐类）反应转化成红色甲臢化合 物，可通过酶标仪进行检测。颜色形成的量与裂解细胞的数目成正比。应用一个 96-孔平板读数计 收集可见光波长的吸收值数据。这个分析可用于测量在细胞介导的细胞毒性分析中细胞膜的完整 性，这种情况下目标细胞被效应细胞裂解，可判断细胞受损的程度。 乳酸脱氢酶（LDH ）在胞质内含量非常丰富，细胞处于正常状态下其不能通过细胞膜， 但当细胞受到损伤或死亡时便可释放到细胞外，此时细胞培养液中 LDH的活性与细 胞的死亡数目呈正比，通过用比色法测定并与靶细胞对照孔的 LDH活性进行比较， 可计算出效应细胞对靶细胞的杀伤百分数。该实验方法操作简便、快速，可应用于CTL 和NK细胞活性测定及药物、化学物质或放射所引起的细胞毒性，目前已有 LDH法 测定CTL活性的试剂盒。 同时设4个对照：靶细胞最大释放组、体积校正对照组、背景对照组和自然释放组 按5 ：