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常规细胞培养相关技术研究 主要内容 细胞体外培养 细胞传代 细胞转染 4 细胞冻存、复苏 细胞基础研究方法 细胞培养体外条件 5%CO2 Therm 细胞培养箱 细胞培养基 DMEM 令胎牛血清 RPMI1640 心新生牛血清 ■DMEM/F12 a-MEM 心青霉素 特殊培养基 心链霉素 ■无血清培养基冷庆大霉素 细胞培养一无菌操作 1.紫外线消毒(如移液器、废液缸、试管架等) 2.火焰消毒(培养瓶、瓶盖、离心管、玻璃吸管,镊子) 3.75%酒精消毒 4.废液的处理 加晌拉关昱↓的问所_加的氿 细菌污染 真菌污染 细胞污染是新手最容易遇到的问题,如何解决? 细胞观察 肉眼观察培养液颜色及混浊度 倒置显微镜观察细胞生长状态 □ 休拉关加的入刑 (一)贴附型 成纤维细胞型 上皮型细胞 游走细胞型 多形型细胞 (二)悬浮型 (三)半贴壁型 (一)贴附型 大多数培养细胞贴附生长,属于贴壁依赖性细胞 贴附:是大多数有机体细胞在体内生存和生长发育的基本存 在方式 结果:基于贴附特性,使细胞与细胞之间相互结合形成组 织,有机体的绝大多数细胞必须贴附于一固相表面才能生 存和生长。 培养时:这些细胞被放到体外环境中以后,同样需要贴附于 某一固相表面才能生存和生长,因而属于贴附型细胞 贴附(锚定或锚着)依赖型(性)细胞:唯有贴附于固相表面才 能生存的细胞 1、成纤维细胞型 名称:凡在培养中形态与成纤维细胞类 似的 来源:由中胚层间充质组织起源的组织 如 真正的成纤维细胞:心肌,平滑 肌,成骨细胞,血管内皮 形态:似体內成纤维细胞的形态,胞体 梭形或不规则三角形,胞质向外仲出2 3个长短不等的突起,中有卵圆形核 生长特点:排列成放射状,漩涡状,并 不紧靠连成片,细胞一细胞接触易断开 而单独行动,游离的单独的成纤维样细 胞,常有几个伸长的细胞突起