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经典专科、本科、硕博、研究生、期刊毕业论文 仅供参考 精心整理 仅供参考 勿用作商业用途 几种测定生物大分子分子量方法的比较 摘要：生物大分子是指核酸(多核苷酸)、蛋白质(多肽)、碳水化合物(葡聚糖或多糖)和脂类等。因为分子量小于500的单体可以通过聚合作用形成的大分子。测定生物大分子分子量方法是生物研究的核心之一，分子量是多肽、蛋白质、核酸、酶、多糖以及脂类等鉴定中的首要参数。当前医学，药学及生物科学学科之间交叉渗透为测定生物大分子分子量提供了更多的契机，本文对测定生物大分子分子量的方法：生物质谱法，SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，凝胶渗透色谱法等技术的原理及优缺点进行综述。 关键字：生物大分子 分子量测定 蛋白质 多肽 21世纪是生命科学的世纪，随着人类基因组，水稻基因组等的测序基本完成，蛋白质和结构基因组研究也迅速发展。负责生命活动的是生物大分子，生物大分子之间的相互作用构成了生命活动的基础，因此，测定生物大分子的分子量，深入了解生物大分子的结构功能是掌握生命活动的关键。生物大分子是细胞的基本结构和功能单位,也是研究生命现象中的物质基础.生物体内的分子组成如何?哪些分子才算生物大分子?这些大分子有没有分子量的下限?怎么去测定生物大分子分子量？要想知道这些答案，需要多方位，运用多种方法进行研究。 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 采用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳方法可对蛋白质的组分进行分离，并可精确测得蛋白质的分子量，常用的方法为SDS—PAGE不连续系统。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理：聚丙烯酰胺是由丙烯酰胺和N，-亚甲基双丙烯酰胺经共聚合而成，此聚合过程是由四甲基乙二胺和过硫酸胺激发的，被激活的单体和未被激活的单体开始了多聚链的延伸，正在延伸的多聚链也可以随机地接上双丙烯酰胺，使得多聚链交叉互连成为网状立体结构，最终多聚链聚合成凝胶状。 在一定条件下，蛋白质，多肽在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和核酸在聚丙烯酰胺凝胶电泳及琼脂糖凝胶电泳中，其分子量与电泳迁移率符合的关系。在精确测定与计算相对迁移率时，要求分别测定样品区带中心及指标剂染料区带中心(通常插入铜丝作为标记)与凝胶顶端(聚丙烯酰胺凝胶电泳)或点样孔(琼脂糖凝胶电泳)间的距 QUOTE 离。SDS是十二烷基硫酸钠的简称，它是一种阴离子表面活性剂，加入到电泳系统中能使蛋白质的氢键和疏水键打开，并结合到蛋白质分子上（在一定条件下，大多数蛋白质与SDS的结合比为1.4gSDS/1g蛋白质），使各种蛋白质-SDS复合物都带上相同密度的负电荷，其数量远远超过了蛋白质分子原有的电荷量，从而使其电泳迁移率只取决于分子大小这一因素，根据标准蛋白质分子量的对数和迁移率所作的标准曲线，可求得未知物的分子量。 SDS 电泳法是实验室中应用最普遍的方法,分为还原电泳和非还原电泳,非还原电泳中二硫键未打开,还原电泳中二硫键被还原,蛋白质分子能充分伸展,两者相比,还原电泳的测定结果更为准确。 优缺点：实验成本较低，样品用量少，时间短，操作简单，仪器设备也相对很简单，一套电泳装置即可，分辨率高。但是精确程度相对较低，好的电泳图谱需要一定的技术。 2. 凝胶渗透色谱（GPC） GPC是一种用溶剂作流动相，多孔性填料或凝胶作为分离介质的柱色谱，主要根据溶液中分子体积( 或称分子的流体力学体积 )大小的不同作为分离基础，使被分离样品按分子量大小先后流出色谱柱。凝胶床由多孔溶胀凝胶组成，当样品通过色谱柱时，物质在柱中受到固定相的阻滞作用，分子量大的不能渗入凝胶颗粒，只能沿溶胀凝胶颗粒间的孔隙随溶剂流动，受到的阻滞作用小，移动速度快，流程短而先流出色谱柱；分子量小的将渗入凝胶颗粒，受到的阻滞作用大，移动流速慢，流程长而较后流出色谱。 优缺点：凝胶渗透色谱法分离速度快，分析时间短，重复性好，进样量少，自动化程度高，但设备投入大，价格较高。 3.质谱技术 3.1 MALDI—TOF质谱技术 对热敏感的化合物进行快速加热，可以避免其受热分解而转入气相，所以进行质谱法分析，采用MALDI—TOF法尤为适用，测定的化合物相对分子质量 QUOTE 可达数十万。MALDI—T0F的应用范围广泛，包括有机小分子、有机高聚物和生物大分子。它在生物大分子领域的应用尤为引人注目。 基质辅助激光解吸附质谱技术是将分析物分散在基质分子中并形成晶体，当用激光照射晶体时，由于基质分子经辐射所吸收的能量，导致能量蓄积并迅速产热，从而使基质晶体升华，致使基质和分析物膨胀并进入气相。MALDI所产生的质谱图多为单电荷离子，因而质谱图中的离子与多肽和蛋白质的质量有一一对应关系。TOF的原理是离子在电场作用下加速飞过飞行管道，根据检测器的飞行时间不同，导致测定离子的质荷比（M/Z）与离子的飞行时间成正比。MALDI产生的离子