原创力文档- 1、本文档共8页，可阅读全部内容。
- 2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
2012-2-17
第一节化学合成目的基因
第五章 目的基因的获取 1976年H.G. Khorana提出了用化学方法
合成基因的设想，并于1979年在science
上发表了率先成功地合成大肠杆菌酪氨
酸tRNA基因的论文。
一、目前常用的方法目前常用的方法
磷酸二酯法、 磷酸三酯法、
亚磷酸三酯法、 固相合成法
自动化合成法。
1. 磷酸二酯法 （2 ）合成过程
（1）原理
①保护dNTP的5’端P 或3’端-OH
保证合成反应的定向进行。然后再用酸
或碱脱去保护基团或碱脱去保护基团
②带保护的单核苷酸连接
带5’保护的单核苷酸与带3’保护的另一
个单核苷酸以磷酸二酯键连接起来。
然后去掉一个保护，使其循环往复连 5’端保护的单核苷酸可以同3’端保护的二核苷酸聚合。
接。 保护 连接 去保护 连接
2. 磷酸三酯法 二、化学合成DNA片断的组装
原理与磷酸二酯法一样。只是参加反应的单 化学合成的DNA片断一般在200bp 以内。
核苷酸都是在3’端磷酸和5’-OH上都先连接 需要把几个正确片段连接起来
了一个保护基团。
1. 互补连接法
固相磷酸固相磷酸三酯合成法酯合成法
（（11））互补配对互补配对
将第一个核苷酸的3’-OH端固定在固相支 预先设计合成的片断之间都有互补区域，不同
持物上。（第一个核苷酸不需要保护） 片断之间的互补区域形成有断点的完整双链。
是目前通用的合成方法。 （2）5’端磷酸化
用T4多核苷酸激酶使各个片段的5’端带上磷酸。
1
2012-2-17
2. 互补延伸连接法
（3）连接酶连成完整双链
预先设计的片断之间有局部互补区，可以
相互作为另一个片断延长的引物，用DNA
聚合酶延伸成完整的双链。
T4多核苷酸激酶 使5’-OH磷酸化 5’
文档评论（0）