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- 2020-09-22 发布于天津
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细胞酸性蛋白碱性蛋白的显示
【目的要求】
一、 熟悉细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的化学反应染色一般原理及方法
二、 了解蟾蜍红细胞内酸性蛋白和碱性蛋白在细胞中的分布
【实验准备】
一、 实验材料:活蟾蜍。
二、 试剂:二甲苯、70%乙醇、5%三氯醋酸、乙醚1NHC。
三、 染色液。
(一) 三种母液(实验前配制)
甲:0.2 %固绿染液
乙:1/75N HCl(稀释一倍后 pH=2.0— 2.5)
丙:0.05 % Na2C03稀释一倍后 pH=8.0— 8.5)
(二) 二种蛋白质溶液(实验时混合)
、酸性蛋白固绿染液
甲 +乙(1 : 1),即为 0.1 %酸性固绿染液(1/150NHCIPH=2.0—2.5)o
、碱性蛋白固绿染液
甲 +丙(1 : 1),即为 0.1 %碱性固绿染液(0.025 % Na2C03 PH=8.0-8.5)
三、 Schiff氏试剂(亚硫酸晶红液)
四、 器械:染色器皿,水浴箱,取材制片器械,显微镜等 o
【实验原理】
蛋白质的基本组成单位是氨基酸,它们同时具有氨基和羧基 (在溶液中主要 以一NH+,— COO式存在),而自由氨基和羧基的游离取决于溶液的 pH值,当蛋 白质处于酸性溶液时,由于该溶液中正离(OH)多,从而抑制蛋白质中的COOH 电离,于是造成蛋白质带正电荷多;当蛋白质处于碱性溶液时,由于该溶液
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