XX医院免疫组化结果出现差别的处理流程.docVIP

PAGE 1 - 免疫组化结果出现差别的原因及处理流程 对照／标本无染色 1、确认是否忽略了应该加的某种试剂，包括一抗、二抗及底物等。 2、确认所有的试剂是否按正确的顺序加入，是否孵育了足够的时间。 3、对照抗体的标签确认是否使用了正确的抗体，以及所用的检测系统是否和一抗匹配。 4.检查抗体所使用的稀释度和稀释液的种类和浓度。 5.检查抗体的有效期和保存条件。 弱阳性 1、标本的固定方式是否得当。 2、不适当的抗原修复方式。 3、抗体的稀释度是否过高或者孵育的温度／时间是否正确。 4、切片上遗留了过多的冲洗液，当抗体加至切片上时，等于人为的对抗体进行了进一步的稀释。 5、孵育时切片是否放置水平，否则会导致抗体流失。如果阴性对照没有反应，阳性对照反应良好，而标本弱阳性，则可能是由于阳性对照不是同一种组织、或固定方式不同等原因所致。 非特异性染色 1、是否有效地去除了内源性酶和生物素。 2、是否选择使用了正确的封闭血清。 3、 所选择的抗体是否符合试验要求。因抗体不纯、标本中含有靶抗原相似的抗原决定簇等原因造成的非特异性染色只能通过采用高纯度、高效价的抗体或探针对更具特异性的抗原决定簇的单克隆抗体来解决。 4、一抗的使用浓度是否过高。 5、清洗是否充分。 6、DAB的使用是否正确。DAB的孵育时间和配制方式可以产生某些背景颜色，使用浓缩型DAB试剂盒时，请严格按照说明书标明的滴加顺序操作，注意校正蒸馏水的pH值，以确保实验结果的正确性；粉剂DAB溶解时，常有一些不溶性颗粒，这些颗粒须经过滤除去，否则可能沉积于切片组织上，产生斑点状着色。另外，DAB保存不妥产生的氧化物亦可沉积于切片上，因此需将DAB保存于避光干燥处，现用现配，临用前加H2O2，.孵育时间过长也会造成背景染色。 7、标本染色过程中是否曾经干涸，否则会造成边缘部的非特异性染色。 8、检查二抗与标本的内源性组织蛋白是否有交叉反应。 染色过强 1、抗体的浓度过高或抗体孵育时间过长，温度过高。 2、DAB显色时间过长或DAB浓度过高。显色时间不能超过5-10分钟，以显微镜下观察为准。 染色弱 1、抗体浓度过低，孵育时间过短。应该提高抗体浓度，孵育时间不能少于60分钟。 2、试剂超过有效使用期，应该及时更换试剂。 3、操作中，滴加试剂时缓冲液未沥干，致使试剂稀释，每步滴加试剂前沥干切片中多余的缓冲液（但防止切片干燥）。 4、室温太低，低于15℃。