酶制剂生产技术 植物细胞培养和发酵 2.5.2植物细胞培养和发酵.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * 酶制剂生产技术模块二 酶的发酵生产 生物化工学院 兰欣 引入-动植物细胞大规模培养的意义 概念：动植物细胞培养是指动植物细胞在体外条件下的存活或生长，此时细胞不再形成组织。 （组织培养：组织或细胞在体外培养使之生存和生长，并保持组织分化、组织结构和功能。） 意义：虽然微生物的培养已经用来生产大量的对人类有益的产品，但是动植物细胞的大规模培养可以获得一些微生物培养所不能得到的重要的酶制剂产品。 特点：1、对环境条件要求高，对环境变化反应十分敏感；2、对营养素要求严格；3、生长相对缓慢。 学习情境八 细胞培养产酶 工作任务 （一）动植物细胞的特点 工作任务 （二）植物细胞培养和发酵 工作任务 （三）动物细胞发酵产酶 7.3 植物细胞培养简介 植物细胞培养流程 工作任务 （二）植物细胞培养和发酵 第一节 基本概念 第一节 基本概念 第一节 基本流程 请比较：植物组织培养过程 离体的植物器官、 组织或细胞（外植体） 愈伤组织 根、芽 植物体 脱分化 再分化 愈伤组织：在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞（细胞排列疏松、无规则）。 补充：愈伤组织的形成 第二节 植物细胞的形态及生理特征 一、植物细胞的形态 二、植物细胞的结构特征 动物细胞 植物细胞 细胞膜 细胞核 线粒体 内质网 高尔基体 核糖体 中心体 细胞壁 叶绿体 液 泡 植物细胞与动物细胞比较 第三节 植物细胞的培养 植物细胞培养从植物组织培养而来，植物组织培养主要用于形成组织和再生成植株 细胞培养主要生成次生代谢产物 基本技术： 植物材料的准备 培养基制备 培养方法的选择 常用培养基 MS、N6、B6、LS、RM-1964、H、T、B5、DBMII、米勒、改良怀特、尼许等。 MS培养基是目前应用最多最普遍的培养基。无机盐的浓度较高，能保证组织培养生长所需的矿物营养。并且因为离子浓度高，在配制、贮存、消毒过程中，即使有些成分略有出入，也不致影响培养基中的离子平衡。 植物细胞生物反应器 植物细胞易聚集，较脆弱，代谢途径和代谢产物累积与细胞生长关系复杂，选择合适的培养方法和反应器 细胞培养周期长，次生代谢产物含量相对较低，提取困难，生物反应器技术还有待深入 各种生物反应器性能比较 不同类型的生物反应器各有优缺点，改进的搅拌式生物反应器和气升式反应器更适合植物细胞的培养。 悬浮培养的细胞在干重≤20g/L时，以气升式反应器为宜；当干重＞20g/L时，改进的搅拌式生物反应器较优 植物细胞培养工业化存在的问题 生长缓慢,通常完成一次生产周期需4-5周 次级代谢物含量低 培养细胞不稳定等 多数产物积累于胞内 不耐受剪切力 一般的说，只有当次级代谢产物的价格高于1000美元/kg时，才考虑采用植物细胞培养方法。 植物细胞生物反应器 主要有五种类型 1.机械搅拌式生物反应器：对搅拌器加以改进。 优点：反应器内的温度、pH、溶氧及营养物质浓度较其他反应器更易控制。 2.鼓泡塔式生物反应器:通过位于底部的喷嘴及多孔板而实现气体分散。 优点：没有运动部件，操作不易染菌，在无机械输入情况下，提供较高的热量和质量传递，适于对剪切力敏感的细胞的培养，放大相对容易 缺点：流体流动形式难以确定，混合不匀，缺乏相关数据。 3.气升式生物反应器 优点：结构简单，没有泄露点和死角，可以在低剪切力下达到较好的混合和较高的氧传递效果，不易污染，操作费用很低。 缺点：高密度培养时混合不够均匀。 4.转鼓式生物反应器：通过转动促进反应器内的氧及营养物的混合，设置挡板有助于提高氧的传递，在高密度培养时有高的传氧能力。 缺点：难于大规模操作，放大困难。 △5.固定化生物反应器:前体是细胞的代谢产物必须分泌到细胞外。 优点：可保护细胞免受剪切力； 细胞可长时间重复使用 易于实现细胞的高密度培养 细胞间接触良好，易于分化，有利于次级代谢产物的合成 减少细胞的遗传不稳定性 易于实现连续化操作 植物细胞培养类型 将细胞和培养液 一次性装入反应器 内进行培养的技术 以一定的速度向培养系统内添加新鲜 的培养基，同时以相同的速度 流出培养液，从而使培养系统内 培养液量维持恒定 保持细胞密度基本恒定 控制培养基中营养物，主要是生长限制因子的浓度 课堂总结 植物细胞发酵培养 思考： 2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？ 3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？ 主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有