微生物应用基础 细菌的分离筛选 演示文稿-细菌的分离.pptVIP

微生物的菌种选育- 细菌的分离筛选 微生物分离 微生物分离纯化的目的是从混杂的微生物群体中获得纯种微生物。 微生物分离方法有： 平板划线法、简单平板分离法、稀释倾注分离法、涂布分离法、毛细管分离法、小滴分离法以及显微操作单细胞分离法。 相关基础理论－－细菌的培养 一般细菌均可用人工方法进行培养，使其生长繁殖，以便进一步观察和研究他们的各种生物学特征。为了获得良好的细菌培养物，在分离培养细菌时，除采用适宜的培养基，并考虑到其他的培养条件之外，掌握各种分离培养和接种的基本技术，也是重要环节。 培养基 在土壤、水、食品、空气以及人和动、植物中，不同种类的细菌混杂地生活在一起。若要研究其中某种细菌，就必须将各种细菌进行分离，以得到只含有这一种细菌的纯培养。当细菌分离成纯种后，常需要接种到有关的培养基中，以测试其各种生物学性状，不同的细菌需要不同的培养基进行培养。 一、培养基 培养基按其物理性状，分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基。 培养基按用途，分基础培养基、加富培养基、选择培养基、鉴别培养基。 二、细菌的接种方法 将混合的细菌分离的方法有多种，平板划线法即是其中之一，该方法主要是借划线而将混杂的细菌在琼脂平板表面分散开，是单个细菌能固定在某一点，生长繁殖后形成单个的菌落以达到分离纯种的目的。 当细菌分离成纯种后，一般还可用斜面、液体和半固体培养基来检验细菌的培养特征，因此接种方法可相应的分为四种。 平板划线分离法 在被检标本中，常混杂有多种细菌，平板划线分离法可使这多种细菌在培养基表面分散生长，各自形成菌落，以便根据菌落的形态及特征，挑选单个菌落进行纯培养。 常用于分离单个菌落，也可用于观察细菌的生长状况和观察某些生化反应。 平板划线分离法 常用的平板划线分离法有以下两种： （1）连续划线分离法 此法主要用于杂菌不多的标本 （2）分区划线分离法： 本法适用于杂菌量较多的标本 连续划线分离法 分区划线分离法 平板划线分离法--分区划线分离法 （1）分区划线 分区划线法划线分离时平板分4个区，其中第4区是单菌落的主要分布区，故其划线面积应最大。为防止第4区内划线与1、2、3区线条相接触，应使4区线条与1区线条相平行，这样区与区间线条夹角最好保持120度左右。 平板划线分离法--分区划线分离法 （2）灭菌接种环 点燃酒精灯，右手以持笔式握持接种环，并放置火焰中烧灼灭菌，先将接种环的接种丝部分置于火焰中，待金属丝烧红并蔓延至金属端，再直接烧灼金属环直至烧红，然后由金属环至金属杆方向快速通过火焰，随后再反方向通过火焰，如此2~3次。然后将接种环移开火焰，待其冷却。 平板划线分离法--分区划线分离法 灭菌接种环 平板划线分离法--分区划线分离法 （3）取菌种 左手持装有金黄色葡萄球菌或大肠杆菌菌液的试管，用持有接种环的右手手掌及小指拔取试管塞，将试管管口迅速通过火焰2~3次进行灭菌。 将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中，取一接种环的菌液，然后退出菌种管，将菌种管管口再次通过火焰2~3次灭菌，塞好试管塞，放至原来的位置。 平板划线分离法--分区划线分离法 （4）分离划线接种细菌（四区接种法） ①左手持琼脂平板培养基（将皿盖反放在桌上酒精灯附近），尽量使之直立以免空气中的细菌落入其中，并靠近火焰。右手持接种环在琼脂平板上端来回划线，涂成一细菌薄膜（约占平板的1/10），视为一区。划线时使接种环与接种平板面呈30~40度角，以腕力在平板表面行轻而快地来回滑动动作。 ②旋转琼脂平板90度，烧灼接种环，以杀灭环上的残留细菌，将接种环触及培养基表面以使其冷却。灭菌接种环通过薄膜处作连续平行划线（约占平板1/5），此视为二区。 平板划线分离法--分区划线分离法 （4）分离划线接种细菌（四区接种法） ③旋转琼脂平板90度，灼烧接种环灭菌并使之冷却。将灭菌接种环接二区连续平行划线（约占平板1/4），此为三区。 ④旋转琼脂平板90度，接种环不必再灭菌，接三区连续平行划线，划满平板其余部分，此视为四区。 各区接种线间尽量互不交接，以达到细菌逐渐稀释的目的。 平板划线分离法--分区划线分离法 四区划线 平板划线分离法--分区划线分离法