酶解法提取补骨脂中补骨脂素的工艺探究.pptVIP

酶解法辅助提取补骨脂中补骨 脂素的工艺探究 申请专业及年级： 2007 级药物制剂班 指导老师：李锦、张师愚 课题负责人： 丁姣姣 成员：丁姣姣、李亚辉、张文芳、 杨建、刘国婷、杜建华 研究背景 ? 补骨脂素药理作用 对治疗白癜风、银屑病有特效，还有抗肿瘤、抗 病毒、抗凝血及类雌激素作用； ? 目前补骨脂素按部颁标准醇提法提取率较低，补 骨脂素目前已经可以合成，但成本很高且操作繁 琐； ? 中药提取是中药开发的一个重要环节，提取工业 占很大的市场份额； ? 酶解法是一种新的生物提取技术，应用于中药提 取，可显著提高提取效率。 目的 ： 确定复合酶辅助提取补骨脂中补 骨脂素的最佳工艺条件，以提高其提取率。 研究特色： 首次用复合酶来辅助提取补骨脂中补骨 脂素，以提高其提取率，并考虑提取方 法的工业推广。 现状： ? 酶技术应用于中草药有效成分的分离提取取 得了很多成果，现已应用于中药提取，但还 未推广。 ? 酶解法操作简便易行 , 条件温和 , 酶解法可应 用到工业，降低工业生产成本。 ? 用纤维素酶辅助提取补骨脂素和用木瓜蛋白 酶辅助提取已有报道，但用复合酶酶解提取 目前未有报道。 2 、复合酶解法与传统其他方法相比，可大幅 度提高提取率； 3 、酶解法操作简便易行 , 可降低生产成本， 为工业广泛应用提供科学基础。 意义 ： 1 、补骨脂素是补骨脂中的 主要药效成分 拟解决问题： 1 、 确定复合酶的组成及工艺条件 2 、比较复合酶辅助提取与传统方法直 接提取的效果比较 内容 ： 一、确定复合酶的种类组成： ①各种酶分别进行单一酶辅助提取 ② TLC 法比较酶解前后有效成分有无改变 ③以补骨脂素提取量为指标筛选酶解效果最好的三种 酶（若有蛋白酶，需检测蛋白酶对其他酶有无影响） 二、正交试验确定复合酶的工艺条件 三、在酶辅助下以不同提取方法提取，与传统直接提 取方法比较 四、建立 HPLC 法测定补骨脂素含量的方法 以不同的提取方法提取 补骨脂粉碎过筛取样 不同种类的酶预处理 超声提取 超声提取 TLC 法比较加酶与未加酶有效成分是否改变 HPLC 法分别测定补骨脂素含 量 确定复合酶种类 正交试验确定复合酶酶解条件 优化酶解工艺下以不同提取方法提取 HPLC 法测定补骨脂素含量 分别计算补骨脂素提取率 比较提取率得出结论 流程 方法： 一、确定复合酶的种类组成： ⑴分别做各种酶酶用量的单 因素试验，根据补骨脂素 提取量确定各种酶最佳的 酶用量范围； ⑵综合比较各种酶的提取效 率，选择提取效果最好的 三种酶作为复合酶组成。 空白对照 纤维素酶 果胶酶 淀粉酶 木瓜蛋白 酶 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 提 取 率 , 21 , 27.4 , 34 , 43 , 45 , 46 , 46 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 加入量 提 取 率 二、 正交试验设计 以上述酶添加量结果为参考，设置酶添加量的水 平 , 设计六因素三水平试验。（若确定的酶中有 蛋 白酶 ，且蛋白酶对其它酶有影响，则先加前两种， 后加蛋白酶） 因素 水平 A: 温度 （℃） B : 时间 (min) C : pH D : 酶 1 E : 酶 2 F: 酶 3 1 2 3 （ 注：以上六因素水平由具体情况而定。） 三 . 超声提取 提取条件：用 8 倍量的 50% 乙醇，提取补 骨脂 3 次，每次 25~30min 四．薄层层析条件： . 硅胶板 : 硅胶 G 展开剂 : 苯 紫外灯光下检视 五、建立 HPLC 法测定补骨脂素含量的方法 1. 高效液相测补骨脂素含量 色谱条件：填充剂用十八烷基硅烷键合硅胶 流动相：甲醇 — 水（ 55 :45 ） 流速： 0.8ml/min 检测波长： 245nm 柱温： 25 ℃ 2.HPLC 测定方法学考察 线性相关性实验、重现性实验、加样回收实验 等 。 预期结果： 1 、酶解前后有效成分未改变，用 优化复合酶辅助提取后，补骨脂素 提取率提高。 2 、酶解后再用乙醇回流、浸提所 需的乙醇浓度、提取时间比未加酶 时可能都会减少。有广泛应用于工 业的可能。 可行性探究 实验材料可准备齐全 , 仪器与场所本 校皆可提供 , 本课题由专业老师指导