工业色谱谱分离技术.ppt

第九章:工业色谱技术 Chromatography separation in industry) Flow Time 几 几LA 第九章:工业色谱技术( Chromatography separation in industry) 91:色谱分离技术的分类及一般原理 911:概念、分类和原理 色谱分离技术 利用混合液中各种组分之间的理化性质差别在固定相和 流动作相对运动时由于固定相对组分的作用不同的组分在 两相中被反复多次地分配形成特有的区段从而得到分离。 固定相对组分的不同作用包括 吸附, 分配 离子交换 亲和吸附, 凝胶过滤, ·以及聚焦作用等 (二)分配柱层析 洗脱剂 样品 玻璃柱 设想的板 =固定相 M=流动相 分部收集 图3-9柱层析 ·色谱的概念 1903年俄国植物学家茨维特用菊根粉柱和碳酸钙柱分离和研 究植物色素提取物,用石油醚提取过柱,在柱上得到黄色和绿 色的区带,这便是色谱的最初概念 随着检测系统的发展和完善,些无颜色的成分也可以通过仪 器检测,因此色谱分离的概念也就广义化 ·广色谱的概念是推组分(包括有色和无色)在载体上的聚 近年来色谱技术发展很快,显著的特点 是作为固定相的填料如吸附柱,离子交换柱、亲和柱、凝胶 柱等在种类和型号上日益增多,分离性能越来越好, 另一个特点是与之相配套的检测系统日趋完善如紫外可见 光吸收分光光度计 光仪、高效液相色谱仪的配套使用 此种技术的分离效率、在线检测和检测自动化方面都有 足的进展 分离技术的应用范围不断扩大,不但应用于小分子的分离, 对生大分子的分离也在不断地得到应用和推 色谱反应器( chromatography reactor)。 ·色谱技术按其分离过程的原理不同可分为: 吸附色谱 adsorption chromatography): ·吸附色谱分离技术是指混合物随流动相通过吸附剂(固定相 时由于吸附剂对不同物质具有不同的吸附力而使混合物组 分分离这是最早期的一种色谱分离技术如氧化铝柱硅胶 柱等 离子交换色谱 ion exchange chromatography)、 ·离子交换色谱是利用混合液中的离子与固定相中具有相同 电荷离子的交换作用而进行分离的技术。特点 吸附的选择性高,根据待分离组分的带电性、化合 价和电离程度,选择合适的离子交换树脂可以从很稀的 混合溶液中将待分离的组分进行分离和浓缩。 2、适应性强。从分析分离到工业制备分离,小分子到 生物大分子,实验室到工业生产,水的预处理到产品的 分离 3、多相操作,分离容易。通过对树脂进行转型后可反 复伸用 亲和色谱( affinity chromatography) 利用生物对之间可逆亲合力结合的特性,如蛋白质和 辅酶抗原和抗体、激素及其受体等,在色谱柱上进行 分离的技术称为亲和色谱分离。利用生物分子对的这 种特性可以分离和纯化的物质包括酶、蛋白质、酶的 抑制剂、抗体和抗原、激素和药物受体、核酸、基因、 细胞等等。 凝胶色谱(凝胶过滤, gel chromatography, gel filtration, el osmosis ·当混合物随流动相经过固定相(凝胶)时,混合物中各组 分按其分子大小不同而被分离的技术,作为固定相的凝 胶起着一种过滤分子的筛子一样,分子量大的组分先流 出,而分子量小的组分后流出,因此此种技术又被称 为分子筛或凝胶过滤。常常被应用于进行分子量的测 定、酶、蛋白质、多糖、核酸的分离和提纯 (2) (4) 5) GOO OOC 图3-45排阻层析的原理 小分子由于扩散作用进入凝胶颗粒内部而被滞留大分子被排阻在凝胶颗粒外面在颗粒之间迅速通过。 B.(1)蛋自质混合物土柱;(#)洗脱开始小分子扩散进入豪胶颗粒内大分于则敏排阻于颗粒之外;(a3) 分子被滞留大分子向下移动,大小分子开始分开;(4)大小分子完全分开(6)大分子行程较短已 洗脱出层析柱,小分子尚在行进中。 分配色谱( partition chromatography) ·利用待分离物(溶质在流动相和固定相溶解度不同而实 现分离的技术,叫分配色谱。主要在气一液色谱或液 液色谱系统中实现。对液一液色谱而言,一般地说,流 动相的极性比固定相要小。比如用吸附在硅胶上的水作 固定相,用氯仿作流动分离乙酰化的氨基酸。如果把这 个关系颠倒过来,用极性强的液体作流动相。则称为反 相分配色谱( reverse phase chromatography,)。比如把某 种萃取剂附于一定支持物上,用水溶液作流动相分离金 属离子就是反相分配色谱的一种 聚焦色谱技术 (chromato- focusing)。 利用具有两性电解质特点的组分氨基酸、蛋白质、酶等 在等电点上的差异当混合物流经具有pH梯度的固定相 时各组分在相应的等电点上进行聚