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眼球甘油冷冻保存在穿透性角膜移植中的应用 眼球甘油冷冻保存在穿透性角膜移植中的 应用 2005年3月第31卷第3期]iangsu』rcQQ!13Q1 节状或半月形的团块,同时细胞膜发生皱缩,凹陷. 然后染色体DNA双链在核小体间断裂形成180, 200bp的片段,在琼脂糖凝胶电泳中呈现特征性梯 状DNA图谱.细胞膜将细胞质分割包围,有些包 围染色体的断片形成多个膜结构不完整的泡状小 体,即为凋亡小体. 细胞膜结构的改变是细胞凋亡和坏死的基本过 程.细胞膜上的磷脂酰丝氨酸(PS)由膜内侧面转 移到膜外,是细胞凋亡早期的一个重要标志. AnnexinV是钙依赖的磷脂结合蛋白,和PS有高度 的亲和力,检测AnnexinV可以作为发生凋亡的早 期标志.本次实验就以FITC标记的AnnexinV用 于检测发生凋亡的细胞. 由于目前肿瘤MDR发生机制大多只能部分解 释多药耐药的现象,而许多结构不同,作用靶点各异 的抗肿瘤药物均可诱导肿瘤细胞的凋亡,所以抗凋 亡作用或许~tIl~瘤MDR的其他机制更能解释为什 么当肿瘤细胞对某一接触过的化疗药物产生耐药性 同时产生MDR.肿瘤细胞抗凋亡作用增强是通过 抗凋亡基因的过度表达和/或促凋亡基因的表达下 降,突变或缺失而完成的.抗凋亡基因主要有 bcl-2,bcl-XL,bd-abl.当bcl-2蛋白过度表达时,可 引起细胞不死亡或死亡率下降的抗凋亡作用,使化 疗药物失去效果,促凋亡基因有bax,bcl—XS,p53. Bax与bcl一2的功能相反.p53表达下降,突变或缺 失时则抑制细胞凋亡,表现为对化疗药物的耐药作 用_3].在本次试验中,我们也反复用免疫组化,流式 细胞仪检测了HTB-56R及HTB-56S的bcb2的蛋 白表达,均未能测到bcl一2的蛋白表达. 参考文献 1JiangHj,LinJJ,TaoJ,eta1.Suppressionofhumanribosomlpro— teinL23AexpressionduringcellgrowthinhibitionbyINF一口.On— cogene,1997,14:473—480. 2TakeshitaA,ShinjoK,OhnishiK,eta1.Newflowcytometric methodfordeetectionofminimallyexpressedmultidrugresist— anceV-glycoproteinonnormalandacuteleukemiacellsusingbi— otinglatedMRK16andstreptavidin-RED670conjugate.JpnJ CancerRes,1995,86:607—615. 3NgAY,BalesW,VeltriRW.Phenybutyrate_inducedapoptosis anddifferentialexpresNonofBaF2,Bax,p53andFasinhuman prostatecancercelllines.AnalQuantHistol,2000,22:45—54. (收稿日期:2003—11—18) 眼球甘油冷冻保存在穿透性角膜移植中的应用.,..?基础与临床? 吴谦鲍连云卢善华李一壮 角膜供体的保存方法分为活性与非活性保存两类,目前 活性保存角膜主要用于穿透性角膜移植,非活性保存只适用 于板层角膜移植.而且,活性角膜保存对于保存的设备和技 术有较高的要求,还不能在一般性的眼科医院开展.近期, 我院眼科中心采用了保存方法较为简单的眼球甘油冷冻保 存方法I_lj,对5例(5只眼)角膜溃疡患者行穿透性角膜移 植,现报道如下. 资料与方法 1.一般资料2004年147月入住我们眼科中心的角膜 溃疡患者5例(5只111~).男性3例,女性2例,年龄35,65 岁.患者均为粘连性角膜白斑,直径gt;4mm,其中1例病变中 央区已穿孔.术前视力手动/5cln3只眼,指数/5ClTI2只眼. 2.材料制备健康成年人死亡6h内摘除眼球,分别经 3洁霉素,4000u/ml庆大霉素溶液各浸泡5min,湿房保存 2,3d.眼球甘油冷冻保存操作按邱孝芝等_1报道的方法. 保存期25d41.5个月. 3.手术方法供体的复水,复温,复形与植片制备:将甘 作者单位:210008南京大学医学院附属鼓楼医院南京市宁益 眼科中心 油冷冻保存眼球取出,先在0.2二性霉素(以注射用水稀 释)中浸泡10rain,然后分别在3洁霉素,4000u/ml庆大 霉素溶液(以生理盐水稀释)中浸泡10rain,最后将稀释的庆 大霉素溶液自视神经残端注入眼内,使之恢复原形.按湿房 保存的眼球,沿角膜缘外1FIlIn剪下带少许巩膜的角膜片, 置