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中药制剂的含量测定技术 ——紫外-可见分光光度法概述 * 目录 基础知识 1 必备知识 2 拓展知识 3 * 基础知识 定义:紫外-可见分光光度法(Ultraviolet and Visible Spectrophotometry)系指通过测定被测物质在紫外-可见光区(200~760nm)对光的吸光度或发光强度,进行物质定性定量分析的方法。 特点:设备简单、操作简便、灵敏度和准确度较高等。 适用范围:中药制剂定性鉴别、杂质检查及含量测定。 紫外-可见分光光度仪的构造 一、仪器工作原理 必备知识 紫外-可见分光光度仪的构造 光源(辐射源) 可见光光源:常用的是钨丝灯和卤钨灯 紫外光源:常用氢、氘等放电光源 一、仪器工作原理 必备知识 紫外-可见分光光度仪的构造 单色器 棱镜单色器:有玻璃和石英两种材料。是依据光的折射率不同,而将其分成不同波长的单色光。 光栅单色器:是利用光的衍射和干涉作用制成的。可用于紫外 、可见和近红外光谱区域,具有良好的、几乎均匀一致的色散率 ,且具有适用波长范围宽、分辨本领高、成本低、便于保存和易 于制作等优点,是目前常用的色散元件。缺点是各级光谱会重叠 而产生干扰。 一、仪器工作原理 必备知识 紫外-可见分光光度仪的构造 吸收池 又叫比色皿。用于盛放分析试液并提供一定吸光厚度的器皿。 一台分光光度计配有几组厚度不同的吸收池,吸收池的大小规格 从几毫米到几厘米不等,最常用的是1厘米的吸收池。 石英池:适用于可见光区及紫外光区。 玻璃吸收池:只能用于可见光区。 一、仪器工作原理 必备知识 紫外-可见分光光度仪的构造 检测器 是通过光电转换元件检测透过光的光通量大小,并将光信号转变成电信号的装置。 检测器应在测量的光谱范围内具有高的灵敏度;线性关系好、线性范围宽; 对不同波长的辐射响应性能相同且可靠;有好的稳定性和低的噪音水平等特点。 光电池:常用的光电池有硒电池和硅光电池。 光电管:它以一弯成半圆柱且内表面涂上一层光敏材料的镍片作为阴极,而置 于圆柱形中心的一金属丝作为阳极,密封于高真空的玻璃或石英中构成的,当光 照到阴极的光敏材料时,阴极发射出电子,被阳极收集而产生光电流。 光电倍增管:光电倍增管是一种加上多级倍增电极的光电管,其外壳由玻璃或 石英制成,阴极表面涂上光敏物质,在阴极、阳极间装有一系列次级电子发射极 ,D1、D2……等。 一、仪器工作原理 必备知识 紫外-可见分光光度仪的构造 信号指示系统 是把检测到的信号以适当的方式显示或记录下来。常用的信号指示装置有直读检流计、电位调节指零装置以及数字显示或自动记录装置等。常用的显示方式有数字显示、荧光屏显示、曲线扫描及结果打印等多种。高性能的仪器还带有数据站,即可对分光光度计进行操作控制,又可进行数据处理 一、仪器工作原理 必备知识 操作通法 仪器接通电源,预热 根据测定波长,选择相应光源,继续预热(各型号仪器在操作顺序上略有区别) 灵敏度钮置1档 将盛有供试品溶液及空白(参比)溶液的吸收池放入吸收池架,使空白(参比)溶液置光路位置,盖好供试品室盖 量程选择钮置T位置 二、仪器操作通法 必备知识 操作通法 断开光路调节仪器零点,使显示为0。打开光路调节仪器透光率,使显示为100% 量程选择钮置A位置 将供试品置于光路中,读取供试品的吸光度值 仪器使用完毕,取出吸收池,关机,登记 不同型号的紫外分光光度计其操作方法和要求亦有所不同,使用前应详细阅读使用说明书 二、仪器操作通法 必备知识 注意事项 量瓶、移液管及吸收池 均应经洗净、校正后使用 在使用紫外-可见分光光度计前,应对吸收池、最大吸收波长、杂散光、狭缝宽度、吸光度的准确度等进行校正和检定 制剂含量的测定 二、仪器操作通法 必备知识 根据光路数目和波长种类的不同,分为单光束分光亮度计和双光束分光光度计及单波长分光光度计和双波长分光光度计。 单光束分光光度计的工作原理 由光源发出的光,经单色器获得一定波长的单色光(平行光),单色光作为入射光轮流照射参比溶液和供试品溶液,分别测得参比溶液和供试品溶液的吸亮度并计算含量的方法 拓展知识 紫外-可见分光光度计工作原理 单波长双光束分光亮度计的工作原理 从光源中发出的光经单色器分光后经反射镜(M1)(或切光器)分解为强度相等的两束光,一束通过参比溶液,另一束通过供试品溶液,检测器在不同的瞬间接受和处理参比信号和供试品信号,并自动比较两束光的强度,其信号差经对数转换系统处理后由显示器显示出透光率、吸亮度、浓度。也可对不同波长的入射光的测定结果进行扫描,绘制吸收光谱,进行定性、定量分析。 拓展知识 紫外-可见分光光度计工作原理 双波长分
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