蛋白质定向进化技术.ppt

蛋白质定向进化技术 DE technology of Protein 108032008105-108032008120  蛋白质定向进化技术 ☆定义( definition) ☆原理( theory) ☆显著特征( marked features) ☆获得多样性文库方法( methods) ☆筛选方法( screening technique) ☆应用及展望( application and prospects)  蛋白质定向进化技术∝ 定义 定向进化技术是一种在生物体体外(试管 中)模拟达尔文进化,利用自然选择的动 力进化出在自然界并不存在的或是具有更 优性质的蛋白。  蛋白质定向进化技术 定向进化是改造蛋白质分子的一种有效的新策略 主要是在实验室里模拟自然进化过程,通过由易 错PCR、致突变茵株诱变等方法对编码蛋白质 的基因进行随机诱变,由DNA改组、随机引导 重组和交错延伸等方法进行突变基因体外重组, 设计高通量筛选方法来选出需要的突变株。它不 仅可快速产生工业上有用的新酶,而且对研究蛋 白质的结构与功能的关系具有非常重要的意义。  蛋白质定向进化技术 自然界:蛋白质→进化→特定的生物学功能 机体外复杂的化学体系中一些特征N9人们期望, 如产物抑制。获得具有新的功能和特性的蛋白质:一是 从大量未知的自然种系中寻找;二是改现有已知的天然 蛋白质或酶。 对于在自然进化过中没有经过选择的特性来说,后 条途径可能更合适。→产生发展  蛋白质定向进化技术 DE属于蛋白质的非理性没汁,它不用事先了解蛋 白质的结构、保守位点、催化机制等,具有相当大 的应用价值。 这项技术综合了分子生物学的方法和高通量的 刷选技术从而使其更具优势,可以简化试验过程 并且能够筛选出即便只有小幅提高目的性状的突 变体  蛋白质定向进化技术 DE始于上世纪70年代,最早的一个例子是进化 个来源于大肠杆菌的EbgA蛋白,这个酶几乎 不具备β-半乳糖苷酶的活性。通过以乳糖为单 碳源的平板上筛选Lac-缺失的大肠菌株,野生 型的EbgA就进化成为了具有β-半乳糖苷酶活 性的酶  蛋白质定向进化技术 原理 DE的原理是对目的基因进行突变、重组、表达和 筛选,在试管内模拟蛋白质的自然进化过程,获取 人们需要的、具有特定性质和功能的蛋白质。  蛋白质定向进化技术 3个显著特征 (1)进化的每一关键步骤都受到严密控制。 (2)除修饰改善蛋自质已有特性和功能外,还可引入 一个全新的功能,来执行从不被生物体所要求的反 应:甚至为生物体策划十个新的代谢途径。 3)能从进化结果中探索蛋白质结构和功能的基本特  蛋白质定向进化技术 基本步骤 第一步是由一个靶基因或一群相关的家族基因起 始创建分子多样性;然后对该多样性文库的基因 产物进行筛选,那些编码改进功能产物的基因被 利用来继续下一轮进化重复这个过程直到达到目 标。