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实验五 分子荧光法测定罗丹明B的含量
一、目的要求
1.掌握荧光法测定罗丹明B含量的基本原理。
2.了解分子荧光分光光度计的基本构造和原理，并能简单操作。
二、实验原理
罗丹明B在水中是强的荧光物质，并且在低浓度时，荧光强度与罗丹明B浓度呈正比：
If =kc
基此，测定一系列已知浓度的罗丹明B的荧光强度，然后以荧光强度对罗
丹明B浓度作标准曲线，再测定未知浓度罗丹明B的荧光强度，把它代入标准曲线方程求出其浓度。
图1 罗丹明B的分子结构
三、仪器与试剂
1．仪器 CRT970分子荧光分光光度计（上海三科仪器公司）。
2．试剂
（1）罗丹明B标准储备液(1.000?10-2 g?L-1) 准确称取准确称取0.005
（2）罗丹明B标准使用液(1.000?10-5 g?L-1 ) 吸取0.500 mL上述罗丹明B储备液于
四、实验步骤
1．系列标准溶液的配制 取6只100 mL的容量瓶分别加入1.000?10-5 g?L-1 罗丹明B标准使用液0，2.00，4.00，6.00，8.00，1
2．绘制激发光谱和发射光谱 在200~800 nm范围内扫描激发光谱；在300~800 nm范围内扫描荧光发射光谱。
3．绘制标准曲线 将激发波长固定在556 nm，荧光发射波长固定在573 nm处，测定系列标准溶液的荧光发射强度。
4．未知试样的测定 准确移取一定量的罗丹明B未知溶液于100 mL的容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，配制成未知样品。在标准系列溶液同样条件下，测定未知样品的荧光发射强度。
5．绘制荧光强度If对罗丹明B溶液浓度c的标准曲线，并由标准曲线求算未知试样的浓度。
五、数据处理
1.原始数据
浓度/1?10-7 g?L-1
0
1
2
3
4
5
x
荧光强度If
荧光强度If ,(扣除空白)
2.标准曲线绘制和未知样品含量计算。
六、注意事项
使用荧光石英比色皿时，只能拿棱边，并且必须用擦镜纸擦干透光面，以保护透光面不受损坏或产生斑痕。在用比色皿装液前必须用所装溶液冲洗3次，以免改变溶液的浓度。
七、思考题：
1.为什么罗丹明B会发荧光？
2.荧光分光光度计有哪些部件组成？
3.如何绘制激发光谱和荧光光谱？
4.哪些因素可能会对罗丹明B荧光产生影响？
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