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转基因 ——动植物转基因方法 技术 引言 FOREWORD 转基因技术（Genetically Modified） 运用科学手段从某种生物体中提取所需要的基因，将其转入另一种生物中，使与另一种生物的基因进行重组，再从结果中进行数代的人工选育，从而获得特定的具有变异遗传性状的物质。 与杂交不同，该技术利用转基因技术可以创造新染色体，改变动植物性状，培育新品种，具有更大的随机性、不确定性。也可以利用其它生物体培育出期望的生物制品，用于医药、食品等方面。 转基因技术 转基因技术的步骤 植物转基因方法 动物转基因方法 转基因技术的应用 转基因技术的前沿发展 我们身边的合成生物学 转基因 技术 【DAWN_ZX】 【DAWN_ZX】 转基因 技术 转基因技术的步骤 STEP1：目的基因的获取 方法： （1）从基因文库中获取 （2）利用PCR技术扩增目的基因 （3）人工合成 【DAWN_ZX】 转基因 技术 转基因技术的步骤 STEP2：基因表达载体的构建 目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用抗生素基因。 【启动子】是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。【终止子】也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。 【DAWN_ZX】 转基因 技术 转基因技术的步骤 STEP3：将目的基因导入受体细胞 （1）导入植物细胞一般用农杆菌转化法，也可用基因枪法或花粉管通道法。 （2）导入动物细胞一般用显微注射法。 （3）导入微生物细胞一般用感受态细胞吸收DNA分子的方法。 【DAWN_ZX】 转基因 技术 转基因技术的步骤 STEP4：目的基因的检测和表达  1.检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因。 方法：采用DNA分子杂交技术。2.检测目的基因是否转录出了mRNA。 方法：采用用标记的目的基因作探针与 mRNA杂交。3.最后检测目的基因是否翻译成蛋白质。 方法：从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原－抗体杂交。4. 进行个体生物学水平的鉴定。 【DAWN_ZX】 转基因 食品 转基因技术的步骤 所用工具： 分子手术刀——限制性核酸内切酶 来源：从原核生物中分离纯化出来。功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。 【DAWN_ZX】 转基因 技术 转基因技术的步骤 所用工具： 分子缝合针——DNA连接酶连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。 【DAWN_ZX】 转基因 技术 转基因技术的步骤 所用工具： 分子运输车——载体 载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒。 【DAWN_ZX】 转基因 技术 植物转基因方法 载体介导法 农杆菌介导法 DNA直接导入法 化学物质诱导法 电激穿孔法 脂质体法 显微注射法 基因枪法 花粉管通道法 病毒介导法 【DAWN_ZX】 转基因 技术 植物转基因方法 农杆菌介导法 农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位，并诱导产生冠瘿瘤或发状根。 根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒，其上有一段T-DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中。因此，农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。 近年来，农杆菌介导转化在一些单子叶植物（尤其是水稻）中得到了广泛应用。 【DAWN_ZX】 转基因 技术 植物转基因方法 基因枪介导转换法 方法：利用火药爆炸或高压气体加速将包裹了带目的基因的DNA溶液的高速微弹直接送入完整的植物组织和细胞中，然后通过细胞和组织培养技术，再生出植株，选出其中转基因阳性植株即为转基因植株。 优点:不受受体植物范围的限制，而且其载体质粒的构建也相对简单，是目前转基因研究中应用较为广泛的一种