K102 仪器分析技术 W3202标准曲线法定量 W3202标准曲线法定量-4-微教材.docxVIP

农产品与食品质量检测技术教学资源库 PAGE \* Arabic 2 / NUMPAGES \* Arabic 5 《仪器分析技术》课程-微教材 微课编号 W3202 微课名称 标准曲线法定量 所属模块 可见分光光度分析技术 子模块 可见分光光度法的定量 关键词 标准曲线；标准曲线绘制；标准曲线法定量 是否通用 √通用 农产品 食品 是否重点建设 √是 否 微课类型 讲授型 微课形式 PPT动画式 教学设计模式 讲授法 教学目标 了解什么是吸收曲线，其在组分定性定量中的应用 掌握吸收曲线的作用，定性和定量的依据 教学内容 知识点 技能点 标准曲线法的定义 标准曲线法定量的基本步骤 标准曲线法定量的应用 无 知识讲解 1.标准曲线定义 标准曲线法，别名：外标法或直接比较法；是一种简便快捷的定量方法；适用范围：适合大量样品的分析。 定量基础是朗伯-比尔定律：当一定波长的平行单色光通过稀溶液时，吸光度A与溶液的浓度c及光程中液层厚度L的乘积成正比。 朗伯-比尔定律表达式中，比例常数K的数值需要从相应的手册中查到，但手册中给出的数据有限，不可能所有物质在所有波长下的比例常数都能找到，因此需要借助标准曲线法，也称工作曲线法：当入射光波长及吸收池光程一定时，吸光度A与吸光物质的浓度c呈线性关系。以某物质的标准溶液浓度c为横坐标，以吸光度A为纵坐标，绘出A-c曲线，称为标准曲线。在相同条件下测定待测溶液的吸光度，即可通过标准曲线求得待测溶液的浓度。 2.标准曲线的作用 在相同条件下测定待测溶液的吸光度，即可通过标准曲线求得待测溶液的浓度。绘制好标准工作曲线后测定工作就变得相当简单，可直接从标准工作曲线上读出含量，因此特别适合于大量样品的分析。绘制好的标准曲线可以反复使用，但只能供以后在相同条件下操作测定相同物质时使用。 3.标准曲线法基本步骤 (1)标准液浓度的选择：在制备标准曲线时，标准液浓度选择一般应能包括待测样品的可能变异最低与最高值；主要步骤包括：标准溶液的选择、配制及标准溶液吸光度的测定→标准曲线的绘制→样品溶液吸光度的测定→待测组份含量的求算。，一般可选择5种浓度。浓度差距最好是成倍增加或等级增加，并应与被测液同样条件下显色测定。 标准液的测定：在比色时，读取光密度至少读2-3次，求其平均值，以减少仪器不稳定而产生的误差。 (2)标准曲线图的绘制：一般常用的是光密度--浓度标准曲线。 ①用普通方格纸作图。图纸最好是正方形(长：宽=l：1)或长方形(长：宽=3 ：2)，以横轴为浓度，纵轴为光密度，一般浓度的全距占用了多少格，光密度的全距也应占用相同的格数。 在适当范围内配制各种不同浓度的标准液，求其光密度，绘制标准曲线，以浓度位置向右延长，光密度位置向左延长、交点即为此座标标点。然后，将各坐标点和原点联成一条线，若符合朗伯-比尔定律，则系通过原点的直线。 ②若各点不在一直线，则可通过原点，尽可能使直线通过更多点，使不在直线上的点尽量均匀地分布在直线的两边。 ③标准曲线绘制完毕以后，应在座标纸上注明实验项目的名称，所使用比色计的型号和仪器编号、滤光片号码或单色光波长以及绘制的日期、室温。 ④绘制标准曲线：一般应作二次或三次以上的平行测定，重复性良好曲线方可应用。 ⑤绘制好的标准曲线只能供以后在相同条件下操作测定相同物质时使用。当更换仪器、移动仪器位置、调换试剂及室温有明显改变时，标准曲线需重新绘制。 ⑥标准曲线横坐标的标度：从标准液的含量换算成待测液的浓度。 （3）待测组分吸光度的测定：在相同条件下，测定待测溶液的吸光度，即可通过标准曲线求得待测溶液的浓度。 （4）待测组分含量的求算 在标准曲线纵坐标上，找到待测组分的吸光度值，在标准曲线的直线上找到吸光度对应的坐标点，则得到对应横坐标的浓度值。 边学边练 任务：通过具体实验学习标准曲线法绘制过程，并学会应用。 用邻二氮菲为显色剂，采用标准曲线法测定试样中的Fe2+, 按下表吸取10mg/L的Fe（Ⅱ）标准溶液，于100mL容量瓶中稀释至刻度，配制成系列标准溶液，实验得到的标准溶液和样品的吸光度数据见下表，试用标准曲线法确定样品的浓度。 表1 邻二氮菲法测铁实验相关数据 吸取标准溶液的体积 （mL） 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 — 系列标准溶液浓度 （μg/100mL） 0 10 20 30 40 50 60 C样品 吸光度A 0.000 0.097 0.202 0.300 0.400 0.500 0.602 0.520 图1 邻二氮菲测铁标准曲线法