生物制品技术 诊断试剂生产的基本程序 免疫诊断试剂常用仪器与设备.docVIP

免疫诊断试剂常用仪器与设备 免疫分析或称免疫学检验是以抗原抗体相互结合的免疫学反应为基础，主要研究免疫学技术及其在医学领域中的应用。根据分析过程中是否需要标记物分为标记免疫分析和非标记免疫分析两大类。前者根据标记物的不同又分为酶免疫分析、放射免疫分析、发光免疫分析、免疫金(银)标记技术等，后者的主要代表是由最初的免疫沉淀试验发展形成的免疫浊度分析技术。免疫分析技术在对临床疾病的发病机制(特别是免疫反应紊乱机制)的研究、感染性疾病、肿瘤的诊断等方面发挥了重要的作用。为了适应医学检验中自动、快速、简便的要求，随着各种免疫技术的出现，相应的免疫仪器与设备也不断问世。本章介绍免疫诊断试剂常见的仪器与设备。 11．1 酶标仪 酶标仪是采用比色的方法来检测抗原或抗体的含量的仪器，其原理和基本结构与光电比色计几乎相同，因此酶标仪也可以看做是一种光电比色计。由于酶免疫分析中可以采用多种形式的固相吸附载体(如微孔板，试管，小珠，微粒等)，因而酶标仪的结构不尽相同，其中微孔板固相酶标仪是最常用的一种。图11-1是一种单通道，自动进样的酶标仪的工作原理图。 光源发出的光线经过滤光片或单色器后形成单色光，单色光通过微孔板中的待测标本到达光电检测器，光信号转变成电信号，经放大处理后送入微处理器分析计算，显示并打印测试结果。微处理器通过控制电路控制电机运行，将待测标本送入指定的检测位置。酶标仪的光路系统如图ll-2所示。 光源灯发出的光线经过聚光透镜、光栏后，到达反射镜，经反射镜做90°反射后垂直通过比色溶液，再经滤光片到达光电管。滤光片置于微孔板前后的效果是一样的。酶标仪与一般比色计的不同之处在于它盛放比色液的容器是塑料微孔板而不是比色皿，因此酶标仪的光束是垂直通过比色液即微孔板的，另外酶标仪是以光密度OD来表示吸光度的。 酶标仪有单通道和多通道两种类型，自动多通道酶标仪有多个光束和多个检测器检测速度快。如8通道酶标仪有8条光束、8个检测器和8个放大器，其结构相对较为复杂。酶标仪其他结构与光电比色计大体相同。 近年来，为了适应临床检验对质量控制和工作效率的要求，发展了多种形式的全自动、智能型酶免疫测试系统，它们的主要部件由加样系统、温育系统、洗版系统、读板系统、液路动力系统，软件控制系统组成、加样系统中放置样本、酶标记试剂、显色液及终止液等试剂，加样针依靠液路动力系统提供动力，通过注射器分配系统精确加样。温育系统由软件控制温育温度和时间，洗板系统由清洗针，板架，液体进出管路组成，由软件控制洗液量和洗板次数，读板系统由光源、滤光片、光导纤维、光电倍增管组成，检测出的光信号转换成电信号送入微处理器分析计算，得出最终结果。酶标板的移动依靠机械臂或轨道运输系统完成，由软件控制其运动，实现酶标板在各个系统之间的传送。 11.2 发光免疫分析仪 化学发光技术是近20年来发展非常迅速的非放射性免疫分析技术。化学发光免疫测定技术(Chemiluminesent Immunoassay，CLIA)是免疫测定技术继酶免技术(EIA)、放免技术(RIA)、荧光免疫技术(FIA)之后发展的一项新型测定技术。由于发光免疫测定具备很高的特异性和很小的干扰，而且具有灵敏度高、检测速度块、操作简便、试剂无放射性等特点，因此，如同RIA、FIA等一样，利用免疫反应的特异性和化学发光本身的信号特异性形成了目前所说的化学发光免疫测定(CLIA)技术。 11．2．1 发光免疫分析的原理 发光免疫分析技术是将免疫反应和发光反应相结合的一种免疫分析方法。它的基本原理及操作与酶免疫和放射免疫方法基本类似，只是所用的标记物或检测信号不同。化学发光是发光分析系统中的一种，它利用化学反应中所释放的大量自由能从而产生激发态的中间体，该激发态的中间体回到稳定的基态时，同时发射出光子，利用发光信号的测量仪器检测所发出的光量子数。 根据标记物的不同，发光免疫分析技术可分为化学发光免疫分析，化学发光酶免疫分析、微粒子发光免疫分析、生物发光免疫分析、电化学免疫分析。根据发光反应检测方式的不同，发光免疫分析又可分为液相法、固相法和均相法。在发光免疫分析技术中所使用的标记物有3种，即发光反应中消耗掉的标记物，发光反应中起催化作用的标记物以及酶标记物，直接参与发光反应的标记物，在发光免疫分析过程中直接参与化学发光反应，它们的化学结构中有产生发光的特有基团，一般这类物质没有本底发光，但能够测定低水平的标记物，而制备标记物的偶联方法对发光的影响不大；不参与发光反应的标记物，作为一种反应的催化剂或者一种能量传递过程中的受体，不直接参与化学发光反应，标记物加入后起反应的发光物质越多，反应体系所产生的光越强；酶标记物通过其所催化生成的产物，再作用于发光物质，以产生化学发光或生物发光这