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转基因动物鉴定和建系 朱焕章 体细胞核移植 精子 5 转基因动物遗传修饰策略和载体设计 • 转基因表达载体设计策略 ►一般转基因表达载体设计 ►条件性转基因表达载体设计 ►细菌人工染色体(BAC)转基因表达载体设计 • 基因打靶策略和载体设计 ►完全基因剔除 ►条件性基因打靶 ►Knock in ►Gene trap ►大片段染色体重排和删除 The Basic Principles Behind ES cells: 129Sv - agouti Host Blastocysts: C57Bl (Black) Gene Foster Mothers: CD1 (White) Targeting From: Developmental Biology (6th Edition), Scott F. Gilbert, Sinauer Press 转基因小鼠鉴定 • 外源基因整合检测 ► Dot blotting(无同源性时可选用） PCR （快速灵敏） Southern blotting(准确可靠） • 整合位点检测（ＦＩＳＨ／ＬＭ－ＰＣＲ） • 整合拷贝检测（Southern blotting ） • 转录水平 ► Northern blotting ► RT-PCR ► RＮase 保护性分析 • 翻译水平（Western/Elisa) • 生化分析 • 表型分析 1982年，英国的 《自然》杂志发表了一篇文章：有两个美国实 验小组利用转基因技术，将大鼠生长激素重组基因导入到小鼠 受精卵中,培育出具快速生长效应的“转基因超级鼠” （supermouse) 。转基因鼠比与它同胎所生的小鼠生长速度快 2～3倍，体积大一倍。 转基因小鼠鉴定 • 外源基因整合检测 ► Dot blotting(无同源性时可选用） PCR （快速灵敏） Southern blotting(准确可靠） • 整合位点检测（ＦＩＳＨ／ＬＭ－ＰＣＲ） • 整合拷贝检测（Southern blotting ） • 转录水平 ► Northern blotting ► RT-PCR ► RＮase 保护性分析 • 翻译水平（Western/Elisa) • 生化分析 • 表型分析 （一）核酸分子杂交技术 核酸分子杂交 是指单链核酸分子（DNA或RNA）在特定条件下， 与另一条互补的特异核酸链形成稳定双链的过程。 主要依据： 碱基互补、变性和复性 DNA与DNA杂交：A=T 、G≡C ; 碱基互补 DNA与RNA杂交: A=U 、G≡C ; 变性： 在一定温度下，使核酸双链解开为两条单链； 复性： 随温度逐渐恢复，变性的两条单链重新形成互补双链 hybridization • DNA:DNA 5’ A T G C C G A T 3’ T A C G G C DNA:RNA