大赖草木质素及相关合成基因的表达分析.pdf

四川农业大学硕士毕业论文大赖草木质素及相关合成基因的表达分析 摘 要 大赖草（Leymus racemosus (Lam.) Tzvel ）是禾本科（Poaceae ）小麦族（Triticeae ） 多年生四倍体草本物种。具有密集的生殖结构和极强的无性繁殖能力，生长于沙 丘或沙质草地，是一种优良的固沙植物。作为珍贵野生植物资源，其抗干旱、抗 盐碱、抗病虫害等优良基因成为众多学者的研究热点。大赖草抗逆性与其木质素 的生物合成有密切的关系，但影响大赖草抗逆性和木质素及合成途径相关基因的 研究鲜有报道。本研究通过分子克隆得到木质素合成途径的相关基因、并借助系 统发育树对其进行亲缘关系分析；通过基因表达和酶活性监测对大赖草木质素生 物合成途径的代谢规律进行研究，探讨了大赖草木质素生物合成途径关键基因和 酶活性对木质素积累的影响。主要结果如下： 1、经过同源基因序列比对，简并扩增克隆得到了大赖草 4-香豆酸 CoA 连接酶 （4CL ）、香豆酸-3-羟化酶 （C3H ）、肉桂酸-4-羟化酶 （C4H ）、阿魏酸-5- 羟化酶 （F5H ）和苯丙氨酸氨基裂解酶 （PAL ）五个基因的保守序列。结合 RACE 首次得到其PAL 基因的全长cDNA 序列。PAL 基因ORF 为2121 bp ， 编码697 个氨基酸，蛋白质大小为75.9 kDa，5’端非编码区（5’UTR ）长142 bp ，3’端非编码区（3’UTR ）长262 bp ，包含16 bp 的3’PolyA 尾巴。 2 、监测这五个基因年生长周期内相对表达量和酸不溶性木质素含量，结果表明： 4CL、C4H、F5H 、PAL 基因在年生长周期内相对表达量均表现出先上升后降 低，且与木质素含量积累的变化趋势相同，但不同步。说明这四个基因是控 制木质素合成的关键节点，木质素积累量随基因的表达量增加而增加。而C3H 基因的变化则刚好相反，呈现先下降后上升，对木质素的积累有反馈调节。 3、通过年生长周期内对过氧化物酶的监测，发现木质素含量与过氧化物酶活性 的变化趋势相同且同步。说明过氧化物酶对木质素单体的聚合是必须的。 关键词：大赖草、基因表达量、木质素、过氧化物酶 I Abstract Leymus racemosus (Lam.) Tzvel is a perennial tetraploid species with intensive reproductive structure and strong asexual reproduction ability in the Triticeae (Poaceae). As an endangered precious wild plant resource and an excellent sand-fixing plant, many genes, involving resistance to drought, salt, alkali, diseases and insect pests etc, have been recived much attantion by scientists. There is a close relationship between stress resistance and lignin biosynthesis. However, little known about the effects of stress resistance and the genes of lignin biosynthesis pathway in L. racemosus. In this study, the genes of lignin biosynthesis pathway were obtained by molecular cloning, and were analyzed using gene expression and enzyme activity monitoring. We also anal