‘红绵蜜柚’生长素诱导相关基因CgPCNT115的克隆及功能分析.pdfVIP

摘 要 Citrusgrandis (L.) Osbeck.cv.‘Hongmianmiyou’ ‘红绵蜜柚’（ ）是近年从 ‘琯溪蜜 C.grandis (L.) Osbeck.cv. ‘Guanximiyou’ 柚’（ ）芽变株系中选育的优良蜜柚新品种，具 Poncirus trifoliata 有汁多化渣、酸甜适中、丰产性好等优点。在四川产区常用枳 （ ）作 为 ‘琯溪蜜柚’的砧木，而课题组在推广栽培 ‘红绵蜜柚’时发现，以枳为砧木时嫁接 C.junos 苗表现出接穗叶片黄化甚至死亡现象，以香橙 （ ）为砧木时嫁接苗生长势良好， ‘琯溪蜜柚’以枳为砧木同样可以正常生长发育。针对该现象，基于课题组前期转录组 研究数据显示，CgPCNT115 基因与生长素诱导相关，它可能与枳砧 ‘红绵蜜柚’幼苗 黄化密切相关。生长素诱导蛋白PCNT115在许多植物中已经鉴定，其涉及的生理生化 过程较多，但相关功能及机理并不清楚，因此，本研究以 ‘红绵蜜柚’为材料，克隆 CgPCNT115 基因及启动子序列，与 ‘琯溪蜜柚’克隆序列进行了比较分析。同时，对 CgPCNT115 在不同嫁接组合、叶片不同发育时期、不同组织中的表达特性进行了测定 CgPCNT115 IAA 与分析；并对 基因在不同浓度的外源生长素 （ ）及生长素运输抑制剂 TIBA 三碘苯甲酸 （ ）处理下的响应特性进行了探究；瞬时过表达叶片对其功能进行了 初步研究。主要结果如下： 1 CgPCNT115 （） ‘红绵蜜柚’ 基因的克隆 以 ‘红绵蜜柚’为材料，以 ‘琯溪蜜 柚’为对照，从gDNA 中克隆得到CgPCNT115基因及其启动子，基因序列均为1772bp， 但内含子区域存在一些单碱基差异；启动子序列均为2122 bp，且序列完全一致。 CgPCNT115 AKRs 属于醛酮还原酶家族 （ ），含有两个跨膜结构区；基于序列比对和系 CgPCNT115 C.sinensis (L.) Osbeck 统树构建表明，柚 基因与甜橙 （ ）遗传关系最近，其 C.clementina 次是克里曼丁橘 （ ）；启动子序列中存在一个转录起始位点及核心启动子 区域，含有一些特殊的顺式作用元件，如热胁迫响应元件、激素响应的元件、MYB 特 异性结合元件等。 2 CgPCNT115 CgPCNT115 （） 的表达特性 基因表达量在不同嫁接组合中均随着 叶片的发育总体呈上升的趋势，在Phase Ⅳ （叶片SPAD 值为60±5）时，枳砧 ‘红绵蜜 柚’CgPCNT115 基因表达量极显著低于两个对照 （枳砧 ‘琯溪蜜柚’、香橙砧 ‘红绵 蜜柚’）。CgPCNT115 基因在枳砧 ‘红绵蜜柚’果肉中表达量最低，在花中表达量最 高；其次在果实的果皮、海绵层及果肉中表达量相对较低，在茎段、花及叶中表达量较 高。 I 3 CgPCNT115 3 50、 （）