小麦高分子量谷蛋白Bx7-m566GR与By9-m292GE369QR亚基的加工品质效应分析.pdfVIP

摘要 小麦种子储藏蛋白主要包括谷蛋白和醇溶蛋白，其组成及含量决定加工品质； 谷蛋白依据其亚基迁移率的差异，可分为高分子量谷蛋白亚基（HMW-GS ）和 低分子量谷蛋白亚基（LMW-GS ）。HMW-GS 含量虽仅占小麦籽粒蛋白的10%， 但其作为面筋网络“骨架”，显著影响面团的流变学特性，是决定加工品质的关键 蛋白。本实验使用甲基磺酸乙酯（EMS ）诱变小麦品种蜀麦482 ，利用SDS 鉴定其各亚基的迁移率，获得Bx7 和By9 亚基迁移率变慢的突变体单株，再与 蜀麦482 杂交，再使用SDS鉴定杂交后代，筛选纯合个体，以蜀麦482 野生型为对照，构建BC F 群体并测定其加工品质。本实验对Bx7 与Bx7-m566GR 1 4 亚基和By9 与By9-m292GE369QR 亚基进行基因克隆、序列测定及二级结构预 测，并初步其对小麦加工品质的影响，实验结果如下： 1、农艺性状 突变型Bx7-m566GR 与野生型Bx7 植株在成熟期的穗长、分蘖数及小穗数 间无显著差异，但前者的株高高于后者；两个群体间的籽粒性状无显著差异；而 突变型By9-m292GE369QR 与野生型By9 植株的株高、穗长及小穗数间无显著 差异且两者的籽粒性状较为整齐一致；但前者的分蘖数少于后者。 2 、SDS结果分析 SDS检测发现突变型Bx7-m566GR 与By9-m292GE369QR 亚基迁移率 较野生型Bx7 及By9 亚基变慢；而向分离胶中加入4M 尿素(蛋白变性剂)后， SDS检测发现突变型亚基与野生型亚基迁移率一致。 3、HMW-GS 基因克隆及序列对比 利用HMW-GS 基因的N-端和C-端序列的高度保守性，设计特异性引物扩 增Bx7 及By9 亚基的编码区序列。测序结果表明：Bx7 亚基DNA 序列全长为 2370 bp ，共编码788 个氨基酸；而By9 亚基DNA 序列全长为2118 bp ，共编码 704 个氨基酸。经序列比对发现： 野生型Bx7 亚基和By9 亚基均与已报道的的 基因序列一致；而Bx7-m566GR 亚基的基因序列的第1696 位碱基鸟嘌吟（G ） 被腺嘌吟（A ）所替代；导致其氨基酸序列的第566 位点发生改变，即甘氨酸（Gly， G ）被精氨酸(Arg，R)所替换；使其蛋白序列发生改变；而By9-m292GE369QR I 亚基的基因序列的第878 位碱基G 被A 所替换及第1106 位A 被G 替代;导致其 氨基酸序列有两个突变位点，即突变型By9 亚基的氨基酸序列的第292 位的甘 氨酸（Gly，G ）被谷氨酸（Glu，E ）所替代及其第369 位的谷氨酰胺(Gln，Q) 被精氨酸(Arg，R)所替代，进而导致其氨基酸序列发生改变。 4 、二级结构预测分析 使用Antheprot6.6.1 软件对Bx7 与Bx7-m566GR 亚基和By9 与 By9-m292GE369QR 亚基亚基的氨基酸序列进行二级结构预测，发现突变型 Bx7-m566GR 亚基的单个氨基酸变化并未导致其空间结构变化；而 By9-m292GE369QR 亚基的两个氨基酸位点发生改变，致其第292 位氨基酸附近 的β-转角结构变化及第369 位氨基酸附近的β-转角及β-折叠发生变化；最终使 其氨基酸序列的空间结构发生变化，即α-螺旋增加，而无规则卷曲减少。 5、加工品质参数分析 对所测加工品质参数进行分析，发现野生型Bx7 群体与突变型 Bx7-m566GR 的品质参数均无显著差异，但突变型Bx7-m566GR 的籽粒蛋白含量、 湿面筋含量及其沉降值、形成时间，稳定时间和断裂时间较野生型Bx7 群体均 有不同程度的增加；野生型By9 群体与突变型By9-m292GE369QR 群体的品质 参数也无显著差异，但突变型By9-m292GE 369QR 的子粒蛋白含量、湿面筋含 量及其沉降值、形成时间，稳定时间和断裂时间较野生型By9 群体却有不同程 度的增加。 关键词：小麦、加工品质、HMW-GS、SDS、二级结构 II Abstract The composition and content