特基拉芽孢杆菌GYLH-1对稻瘟菌抑制机制的研究以及次级代谢产物的分离.pdfVIP

摘要 稻瘟病是水稻三大病害之一，严重影响水稻产业可持续发展，对全球粮食产量和 安全构成严重的威胁。目前，培育抗性品种和施用化学农药是防治稻瘟病的主要手段。 由于稻瘟菌易变异，培育抗性水稻周期过长，化学农药对人类健康和环境危害严重， 因此寻找有效的稻瘟病防治手段对于粮食安全至关重要。众多研究表明芽孢杆菌具有 良好的抑菌作用和促进植物生长的能力，在生物防治领域得到了广泛的应用。本研究 主要以实验室保存的特基拉芽孢杆菌GYLH-1为研究材料，以稻瘟病为靶标病害，研 究特基拉芽孢杆菌GYLH-1对稻瘟菌Guy11 的抑制机制，包括对菌丝形态、分生孢 子芽管萌发和附着孢形成的抑制；通过离体叶片实验和田间试验评价GYLH-1菌株对 稻瘟病的防治效果；对GYLH-1菌株发酵液中的抑菌物质进行了初步的探究，期望从 中分离出具有抗稻瘟菌活性的新的单体化合物。 实验探究了GYLH-1菌株发酵液对稻瘟菌Guy11抑制作用。通过电子扫描显微 镜观察发现：GYLH-1发酵液能影响Guy11菌丝的形态，使其出现褶皱、畸形和皱缩 Guy11 DNA RNA 等现象；当发酵液加入到稻瘟菌 培养液时，稻瘟菌培养液中 和 等 核酸类物质含量上升，并且可溶性糖含量提高，说明GYLH-1菌株产生某种抑菌物质 破坏了稻瘟菌Guy11 的细胞膜，引起菌体内物质泄露，从而导致菌体死亡。FDA-PI 染色证实了GYLH-1发酵液能破坏了菌丝细胞膜，使细胞膜受损。通过对稻瘟菌 Guy11-GFP 分生孢子形态的观察，发现GYLH-1菌株发酵液对Guy11分生孢子萌发、 附着孢形成具有显著的抑制作用。此外，GYLH-1发酵液含有某种抑菌物质对分生孢 子芽管具有致畸作用，畸形的芽管无法正常形成附着孢。离体叶片实验证明：用 GYLH-1发酵液处理稻瘟菌分生孢子后，其侵染能力与对照组相比显著降低。 离体叶片实验表明，GYLH-1菌株对稻瘟病具有较强的防治效果，并且菌液的防 治效果优于发酵液防治效果，预防效果优于治疗效果。在室内证实了GYLH-1菌株发 酵液和菌液均有稳定得较高活性的前提下，喷施发酵液和菌液处理水稻叶片，发现其 1X 对叶瘟表现出较好得防治效果。喷施 发酵液和菌液效果最佳，有效降低了水稻稻 瘟病的发病情况，与0.1mg/mL 多菌灵的防效相似，此外，研究也证明了GYLH-1菌 株对稻瘟病的预防效果优于治疗效果，可能由于先喷施GYLH-1菌株，使它在水稻叶 I 片上大量定殖，占据有利生态位点，与稻瘟病原菌形成了竞争作用，进一步防止了稻 瘟菌对叶片的侵染。 通过对抑菌物质进行极性大小检测，再结合柱色谱和高效液相色谱技术，对该类 物质进行了分离和纯化。实验表明，其抑菌物质易溶于甲醇和水等大极性溶液，再使 用柱色谱技术进行分离纯化。最后，将收集的具有活性的部分通过高效液相色谱再一 次分离纯化。最后，我们得到一个具有很强活性的纯物质，通过质谱结果显示分析， 其分子量约为475.32. 关键词：稻瘟病，芽孢杆菌，生物防治，稻瘟菌 II Abstract Rice blast is one of the three major diseases of rice, which seriously affects the sustainable development of rice industry and poses a major threat to global grain yield and safety. At present, cultivation of resistant varieties and application of chemical pesticides are the main methods to control rice blast. Because Magnaporthe oryzae is easy to mutate, the cultivation