第四章糖类提取工艺.ppt

4.2.2 糖类的提取方法 此外，廖代伟等应用季胺盐沉淀法、醇析法和钙盐沉淀法提取了香菇多糖；于淑娟等率先用超声波协同酶法提取了灵芝多糖，有效地缩短了提取周期，提高了产品质量。 4.2.2 糖类的提取方法 （5）其他方法 超声波提取法 超临界萃取法 4.2.2 糖类的提取方法 影响糖类提取的因素： （1）原料 （2）提取工艺条件 浸提料液比 （料液比的上升会增加多糖的溶出量，达到一定比例后 ，上升幅度明显下降，且也会对后续工艺造成不良影响，降低生产效率。） 温度（在一定范围内，温度上升伴随着多糖提取率的显著上升） 时间（随着时间的延长，多醣提取率也逐渐增加，但增加的趋势逐渐趋缓，时间太长，提取率有下降趋势，可能是由于受热时间长，多糖的糖苷键断裂导致多糖含量降低。） 4.2.2 糖类的提取方法 （3）分离工艺：采用水提醇沉工艺时，有机溶剂的浓度、加入量等因素会对提取率造成一定影响；采用膜分离工艺时，膜材料、分离顺序、压力等因素都会对提取率产生直接影响。 4.2.3 糖类的分离 （1）分级沉淀法 大多数糖类可溶于水，三个碳原子以下的糖还可溶于乙醇。随着聚合度的增大，糖类在乙醇中的溶解度逐步降低。根据这一性质，可在糖的高浓度水溶液中，分次加入乙醇，使醇浓度逐渐增到5%，10%，15%，20%…90%。分别取出在每个醇浓度梯度下所析出的沉淀，然后，对产量和醇浓度做图，从而粗略地确定出适宜于糖类大量析出的醇浓度。 4.2.3 糖类的分离 在采用沉淀法提取多糖时，一般应将提取液的pH调至7.0左右。在此条件下，糖的性质比较稳定。但是，酸性多糖在pH7.0时通常以盐的形式存在，因此宜将pH调至pH2-4。为了防止糖苷键在酸性介质中发生水解，操作时应迅速，小量。对于性质不明的糖类，可先在小样试验条件下摸索出较为适宜的pH条件。 糖的衍生物，如甲醚、乙酸酯的极性低于糖，可用有机溶剂进行分级沉淀。例如，先将样品溶于丙酮，再逐步添加乙醚，最后再逐步添加低沸点的石油醚，从而使其沉淀下来。 4.2.3 糖类的分离 除了利用溶剂极性强度的改变来对糖类进行分级沉淀以外，还可将热糖液逐步冷却，或逐步添加无机盐（如硫酸铵进行盐析）以及逐渐改变酸度等措施来进行。 分级沉淀是根据糖类分子量的不同而进行分离糖类的一种方法。但是，由于多糖的分子量范围广，且有共沉淀现象。此法只能用于糖类的粗略分离。要获得组分均一、物理常数恒定的糖类，还需反复使用同一种方法或综合使用多种方法才行。 4.2.3 糖类的分离 （2）活性炭柱色谱 用途——分离水溶性物质较好 如：氨基酸、糖类及某些苷类。 特点：（对于活性炭柱色谱） ①上样量大，分离效果较好，适合大量制备； ②来源容易，价格廉； ③缺点：无测定其吸附力级别的理想方法。 4.2.3 糖类的分离 分类： ①粉末状活性炭——颗粒细，总表面积大，吸附力及吸附量大。 ②颗粒状活性炭——颗粒较上者大，吸附力及吸附量也较上者次之。 ③锦纶-活性炭——以锦纶为粘合剂，将粉末状活性炭制成颗粒，吸附力最弱。 4.2.3 糖类的分离 活性炭对物质的吸附规律 对分子量大的化合物吸附力大于分子量小的化合物，即：多糖 单糖 活性炭在水溶液中的吸附力最强，在有机溶剂中吸附力较弱。顺序为： H2O、10%、20%、30%、50%、70%乙醇液 洗脱顺序： 无机盐、单糖等 → 二糖 → 三糖 → 多糖 4.2.3 糖类的分离 （3）离子交换柱色谱 用途： ①除水提液中的酸、碱性成分和无机离子； ②制成硼酸络合物——强碱性阴离子交换树脂（不同浓度硼酸盐液洗脱） 常用的强碱性阴离子交换树脂是Dowex-1。在使用时，先用硼酸盐处理树脂，再将糖混合物的硼酸络合物上柱，即可起到选择性的交换作用。再用浓度递增的硼酸盐溶液依次洗出单糖、双糖、三糖等。 4.2.3 糖类的分离 即使都是双糖或单糖，其吸附力也有区别。例如，下面五种双糖的洗脱顺序为蔗糖、海藻糖、纤维二糖、麦芽糖和乳糖；三种单糖的洗脱分离顺序为D-果糖、D-半乳糖和D-葡萄糖。这种分离方法的效率高，常为一次分离。各级洗脱液经鉴定后合并，迅速用强酸性阳离子交换树脂如Dowex-50除去无机离子， 将再滤液蒸干，在干燥物中加入甲醇，反复蒸馏，以除去挥发性的硼酸甲酯，取得到不含硼酸的糖类。但是，此法缺点是洗脱体积大，处理麻烦。 4.2.4 多糖的纯度检验和结构分析 气相色谱（GC)、液相色谱（HPLC)、毛细管电泳法（CE）常用于多糖的单糖组分分析，甲基化、高碘酸氧化和smith降解、乙酞解、核磁共振、质谱等可用于分析多糖的糖苷键类型