PEG诱导细胞融合（1）.pdf

科目 细胞生物学实验 实验题目 动物细胞融合 日期 2013.03.07 姓名 *** 系年级 2011 级生物基地 学号 *** 实验一 利用聚乙二醇为媒介物进行细胞融合 摘要 细胞融合(cell fusion)是在自发或人工诱导下，两个不同基因型的细胞或 原生质体融合形成一个杂种细胞。基本过程包括细胞融合形成异核体 (heterokaryon)、异核体通过细胞有丝分裂进行核融合、最终形成单核的杂种细 胞。 诱导细胞融合的方法有三种：生物方法（病毒）、化学方法（聚乙二醇PEG）、 物理方法（离心，震动，电刺激）。某些病毒如：仙台病毒、副流感病毒和新城 鸡瘟病毒的被膜中有融合蛋白（fusion protein），可介导病毒同宿主细胞融合， 也可介导细胞与细胞的融合，因此可以用紫外线灭活的此类病毒诱导细胞融合。 化学和物理方法可造成膜脂分子排列的改变，去掉作用因素之后，质膜恢复原有 的有序结构，在恢复过程中便可诱导相接触的细胞发生融合。 关键词 细胞融合；人工诱导；PEG 前言 人工诱导的细胞融合，在六十年代作为一门新兴技术而发展起来。由于它不 仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合，因此细胞融合技术目前被广 泛应用于细胞生物学和医学研究的各个领域。基因型相同的细胞融合成的杂交细 胞称为同核体（homokaryon）；来自不同基因型的杂交细胞则称为异核体 （heterokaryon）。 细胞融合不仅可用于基础研究，而且还有重要的应用价值，在植物育种方面 已经成功的有萝卜+甘蓝、粉蓝烟草+郎氏烟草、番茄+马铃薯等等。细胞融合另 一个重要应用就是制备单克隆抗体，单克隆抗体可以用作诊断试剂，治疗疾病和 运载药物，具有准确，高效，简易，快速等优点。因此，融合细胞的研究为生物 学无论在基础理论上或生产实践上开辟了一条新的道路。这一技术已成为研究细 胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段。 一． 实验目的 1. 了解动物细胞融合的常用方法及原理。 2. 掌握利用PEG 为介导物对细胞进行诱导融合的方法。 3. 观察动物细胞融和过程中细胞的行为和变化。 二． 实验原理 1 化学融合剂聚乙二醇(polyethylene glycol，PEG)是乙二醇的多聚化合物，是存 在一系列不同分子量的多聚体。 PEG可诱导细胞间的融合，主要有两方面的原因： 第一，PEG可以破坏和干扰各类细胞的膜结构，使两细胞相互接触部位的膜 脂双层中磷脂分子发生疏散，进而使其结构发生重排，再加上膜脂双层的相互亲 合以及彼此间表面张力的作用，引起相邻的重排质膜在修复时相互合并在一起, 使两细胞的胞质沟通,从而造成相互接触的细胞之间发生融合。第二，PEG 可与 水分子借氢键结合，在高浓度的PEG 溶液中自由水消失，导致细胞脱水而发生 质膜结构的变化，引起细胞融合。为了发挥PEG 促进细胞融合的效力，必须采 用较高浓度的PEG 溶液，但在高浓度PEG 溶液下，细胞可能因脱水而受到显著 的破坏。因此，选择合适的分子量、浓度及作用时间是PEG 融合技术的关键。 利用PEG诱导细胞融合,其融合效果受以下几个因素的影响： 1.PEG的分子量：细胞融合效果与PEG的分子量成正比，但PEG的分子量越大， 对细胞的毒性就越大。在实验时常常采用的PEG分子量一般为800~1000 。 2. PEG的浓度：细胞融合效果与PEG的浓度成正比，但PEG的浓度越高，对细胞 的毒性就越大。在实验时常常采用的PEG浓度一般为40~60% 。 3.PEG的pH值：经验证，PEG的pH值在8.0~8.2之间融合效果最好。 4.PEG的处理时间：处理时间越长，融合效果越好,但对细胞的毒害也就越大。 故一般将处理时间限制在1~5分钟。 5.融合时的温度：由于生物膜膜的流动性与温度成正比，故细胞的融合效果也 与温度成正比。为了获得更好的融合效果,在细胞可能承受的温度范围内可适当 提高处理的温度。对于哺乳动物的细,一般采用的温度为 38~40℃。本实验所用 材料为鸡的血细胞，这是因为:1).鸡血细胞具有细胞核，便于对融合细胞进行鉴 别；2)