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中 文 摘 要 IV
ABSTRACT III
第一章 文献综述 1
1.1 结直肠癌 1
1.1.1 结直肠癌的特征 1
1.1.2 结直肠癌的治疗现状 1
1.2 化疗耐药与肿瘤 1
1.2.1 化疗耐药性概述 1
1.2.2 化疗耐药性与肿瘤发生发展 3
1.3 葫芦素E 4
1.3.1 葫芦素E 概述 4
1.3.2 葫芦素E 研究进展 4
1.4 Wnt/β-catenin 信号通路 5
1.4.1 Wnt/β-catenin 信号通路概述 5
1.4.2 Wnt/β-catenin 信号通路与肿瘤发生发展 5
1.5 细胞衰老 6
1.5.1 细胞衰老概述 6
1.5.2 细胞衰老与肿瘤发生发展 8
1.5.3 细胞衰老与化疗耐药 8
1.6 本研究的内容和意义 9
第二章 葫芦素E 促进结直肠癌细胞对化疗药物的敏感性 10
2.1 引言 10
2.2 实验材料和仪器 10
2.2.1 细胞株 10
2.2.2 主要实验试剂及配制方法 10
2.2.3 主要实验仪器及设备 12
2.3 实验方法 13
2.3.1 细胞培养 13
2.3.2 MTT 实验 13
2.3.2 细胞克隆形成实验 14
2.3.4 Annexin V/PI 染色流式细胞术检测细胞凋亡 14
2.3.5 流式细胞术检测罗丹明累积 15
2.3.6 荧光定量PCR 15
2.3.7 Western blot 17
2.4 实验结果与分析 19
2.4.1 葫芦素E 增强结直肠癌细胞对化疗药物的敏感性 19
2.4.2 葫芦素E 抑制结直肠癌细胞的药物外排功能 21
2.4.3 葫芦素E 对化疗耐药蛋白ABCC1 、MDR1 的影响 22
2.5 小结 23
第三章 葫芦素E 通过抑制TFAP4/Wnt/β-catenin 促进肿瘤细胞对化疗药物的敏感性
25
3.1 引言 25
3.2 实验材料和仪器 25
3.2.1 细胞株 25
3.2.2 主要实验试剂及配制方法 25
3.2.3 主要实验仪器与设备 26
3.3 实验方法 26
3.3.1 葫芦素E 磁性纳米材料的制备 26
3.3.2 葫芦素E 磁性纳米材料结合蛋白的分离和鉴定 27
3.3.3 细胞核蛋白与细胞质蛋白的提取 27
3.3.4 Western blot 27
3.3.5 荧光定量PCR 27
3.3.6 免疫荧光染色实验 27
3.3.7 GFP-β-catenin 和shβ-catenin 的转染实验 28
3.3.8 MTT 实验 28
3.3.9 Annexin V/PI 染色流式细胞术检测细胞凋亡 29
3.3.10 pLVX-AcGFP1-N1-TFAP4 的构建 29
3.3.11 GFP-TFAP4 的转染实验 32
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