微生物学检验操作作业流程及评分统一标准.doc

显微镜使用操作步骤及评分标准 项目 内容 分值 扣分标准 扣分 目标 掌握显微镜使用方法及注意事项 用物 准备 光学显微镜、载玻片、擦镜纸、香柏油、脱油剂 素质要求 让学生能够熟练使用显微镜 操 作 步 骤 1.安放：把显微镜放在自己前面略偏左桌面上，这么便于用左眼观察物像，用右眼看着画图。安放时镜筒向前，镜臂向后。? 2.对光：转动转换器，使低倍物镜正对通光孔，并使物镜前端和载物台有两厘米左右距离。然后把反光镜对着光源，不过反光镜不能直接对着太阳。只要视野光亮程度适宜，光就对好了。? 3.观察：对好光后，把显微镜玻片标本放在载物台上，并使玻片上标本对着通光孔中心，再用压片夹夹住。然后慢慢地转动调焦螺旋，直到靠近玻片为止。接着，用左眼向目镜内注视，同时反方向转动调焦螺旋，直到看清物像为止。 4.再放大：选好一个放大目标，再把要放大部分移到视野正中心，假如物像不清楚，再转动调焦螺旋。假如还观察不清楚，就必需换用高倍物镜。用高倍物镜观察时，高倍物镜顶端离玻片很近，稍不小心，镜头就会压到玻片，所以要尤其小心。? 5.在显微镜里看到物像是倒像，所以，要使物像向上移动，就要向下移动玻片；要使物像向左移动，就要向右移动玻片。? 注 意 事 项 1.先用低倍镜观察，用低倍镜能看清，就不再用高倍镜。 2.必需保护好镜头。 3.载物台要保持清洁干燥。? 4.转动调焦螺旋不要用力过猛，以防损伤机件。? 5.取用显微镜要轻拿轻放，要用右手握镜臂，左手托镜座。? 6.使用完成，要把显微镜外表擦洁净，并把镜筒旋下至最低处。最终把显微镜放入镜箱，送回原处保留。 细菌形态学检验操作步骤及评分标准 项目 内容 分值 扣分标准 扣分 目标 掌握革兰染色基础原理和操作方法 用物 准备 革兰染色液、生理盐水、载玻片、接种环、酒精灯、显微镜、香柏油、蜡笔、擦镜纸、脱油剂 素质要求 能够熟练对细菌标本进行染色，观察结果，对细菌进行分类 操 作 步 骤 （1）涂片：取清洁无油迹载玻片1张，用蜡笔划线将其分成左右两格。用接种环先挑取生理盐水1~2环于载玻片每格中央，再分别挑取大肠杆菌和葡萄球菌少许菌落和生理盐水研匀，涂成直径约1.5cm菌膜。 （2）干燥：让涂片自然干燥，也可在酒精灯火焰较远处微微加热烘干，但切勿靠近火焰。 （3）固定：干燥后标本片在酒精灯火焰上往返经过3次（以钟摆速度），冷却后染色。固定目标在于杀死细菌，并使菌膜和玻片牢靠粘附，避免染色过程中被水冲洗掉，经过固定还可凝固细胞质，改变细菌对染料通透性，使细菌易和染料结合而着色。 （4）染色：结晶紫---卢戈碘液---95％乙醇----稀释石炭酸复红---待干、镜检（初染）----（媒染）----（脱色）----（复染） 注 意 事 项 1.革兰氏染色成败关键是酒精脱色时间。? 2.染色过程中勿使染色液干涸。 3.选择幼龄细菌。G+菌培养12h-16h，E.coli培养24h。 基础培养基制备和灭菌操作步骤及评分标准 项目 内容 分值 扣分标准 扣分 目标 掌握基础基础培养基配制步骤、灭菌方法及注意事项 用物 准备 牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂粉、1mol/L?NaOH、1mol/LHCl 试管、吸管、平皿、锥形瓶、量筒、吸管、精密PH试纸、天平、滤纸 素质要求 要求熟练操作培养基配制和灭菌 操 作 步 骤 一、培养基配制 1.配制溶液? 2.调整pH值? 3.过滤? 4.分装? ?? 二、培养基灭菌 ?1.开盖? ?2.通电 ?3.加水????? 4.放样????? 5.设定温度和时间? 注 意 事 项 调整PH值时，要边滴氢氧化钠边搅拌，不能一次加太多 加热时间控制好，不然培养基会煮糊。 灭菌是要注意将灭菌锅里空气排洁净。 注意灭菌时间和温度控制。 细菌接种培养法操作步骤及评分标准 项目 内容 分值 扣分标准 扣分 目标 掌握细菌接种方法及操作步骤 用物 准备 温箱、酒精灯、接种环、接种针、L形玻棒、打火机、记号笔 素质要求 能够熟练操作多种接种方法 操 作 步 骤 （一）平板划线接种法（又称分离培养法）? 烧灼接种环，杀灭环上残留细菌，待冷，从薄膜处取菌作连续平行划线，约占平板表面1/5左右，再次烧灼接种环，等三次平行划线……以一样方法作第四次，第五次划线，将平板表面划完。划线完成，盖上平皿盖，底面向上，用标签或腊笔注明菌名检验号码，接种者信息等，置37℃孵育培养二十四小时后观察结果。 （二）斜面培养基接种法?? 试管口部于火焰上往返经过2~3次灭菌，将灭菌白金环伸入有菌试管中，取少许细菌，然后移至准备接种试管中。?? 接种方法是自管底向上连续平划线，若以保留菌为目标时可自管底上划一粗直线即可。?? 取出接种环，将试管上部再经火焰灭菌，塞好棉塞，接种环灭菌后放回原处。????? （三）半固体培养基穿刺