《培养基的配制》.pptVIP

培养基的配制 培养基(culture medium)是指人工配制的、适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。 自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究目的不同，所以培养基的种类很多，不同种类的培养基一般都应含有微生物生长所需的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水六大营养要素，且各成分比例应合适。 为了满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求，还必须控制培养基合适的pH。 实验原理 牛肉膏蛋白胨培养基 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCL提供无机盐。 琼脂在常用浓度下96℃时溶化，在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。 常用培养基： 牛肉膏蛋白胨培养基广泛用于细菌的培养； 高氏一号培养基用于培养放线菌； 马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养霉菌。 常用凝固剂是琼脂，固体培养基琼脂加量通常为1.5%-2%；半固体培养基琼脂加量为0.5%-0.8%。 实验分组安排 4-5人一组 配制牛肉膏蛋白胨固体培养基 400 mL 马铃薯糖琼脂培养基 200 mL 淀粉琼脂培养基（高氏培养基）200 mL 平皿30个 99 mL无菌水 装三角瓶 6 瓶 9 mL无菌水 试管装 12 支 1 mL 吸管 15 支 牛肉膏蛋白胨固体培养基 斜面 5支 牛肉膏蛋白胨培养基配方： 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂 15-20g 水 1000ml pH 7.4-7.6 淀粉琼脂培养基（高氏培养基） ： 可溶性淀粉 20 g 硝酸钾 1 g 磷酸氢二钾 0.5 g NaCl 0.5 g 硫酸镁 0.5g 硫酸亚铁 0.01克 琼脂 15-20g 水 1000ml pH 7.2-7.4 马铃薯蔗糖琼脂培养基： 把马铃薯洗净去皮，取200克切成小块，加水1000毫升，煮沸半小时后，补足水分。在滤液中加入15克琼脂，煮沸溶解后加蔗糖20克补足水分 pH值调到7.2～7.4 1、称量及溶化 2、调pH 3、加琼脂、溶化、定容、（过滤） 4、分装、加塞、包扎 5、灭菌 6、摆斜面 操作步骤 称量与溶化： 注意： 1）牛肉膏的称取：用玻璃棒蘸取适量牛肉膏，抹于称量纸上，勿取过量，不足时，再蘸取少量，逐步添加；然后将牛肉膏连同称量纸放入水中，稍等片刻牛肉膏即从称量纸上脱落，用玻璃棒将纸捞出即可。 操作步骤 (continued) 称量与溶化： 注意： 2）蛋白胨很易吸湿，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净，擦干，再称取另一药品．瓶盖也不要盖错。 操作步骤 (continued) 调pH值： 在未调pH值前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1 mol/L NaOH边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH，直至pH达要求。反之，用1mol/L HCl进行调节。 操作步骤 (continued) 加琼脂、溶化、定容、（过滤） ? 琼脂一般应在调好了pH后加入，琼脂的加入不会影响培养基的pH。 ? 琼脂加入后应煮沸数分钟，以使其完全溶化，否则易出现分布不均，导致部分斜面不凝固或过软，另外部分则琼脂过多。 ? 加热过程中因水分蒸发而可能使培养基体积减小，应补充水分至所需量。 操作步骤 (continued) 分装： 1）装量： 液体——试管高度的1/4左右 固体——试管高度的1/5 ，灭菌后摆斜面 半固体——一般为试管高度的1/3，灭菌后垂直放置 操作步骤 (continued) 棉塞制作方法： 加塞： 棉塞 或 硅胶塞 作用：防止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性能。 包扎： ◇加塞后，试管通常每7支一起，包上一层牛皮纸或两层报纸，用线绳扎紧。三角瓶加塞后也用牛皮纸包扎。 ◇以活结形式扎紧，以便使用时容易解开。 ◇用记号笔注明培养基名称、配制日期、配制人或实验组。 操作步骤 (continued) 灭菌时包牛皮纸 灭菌： ◇ 培养基灭