简述转基因关键技术原理.docVIP

转基因技术理论基础起源于 进化论衍生来分子 生物学。 基因片段起源能够是提取特定 生物体 基因组中所需要 目标基因，也能够是 人工 合成指定序列 DNA片段。DNA 片段被转入特定生物中，和其本身基因组进行 重组，再从重组体中进行数代人工选育，从而取得含有稳定表现特定遗传 性状个体。该技术能够使重组生物增加大家所期望新性状，培育出新品种。 1992年 荷兰培育出植入了人促红细胞生成素基因转基因牛，人促红细胞生成素能刺激红细胞生成，是诊疗 贫血良药。转基因技术标志着不一样种类生物基因全部能经过基因工程技术进行重组，人类能够依据自己意愿定向地改造生物遗传特征，发明新生命类型。同时转基因技术在药品生产中有着关键利用价值。转基因技术，包含 外源基因 克隆、 表示载体、 受体细胞，和转基因路径等，外源基因人工合成技术、 基因 调控网络人工设计发展，造成了二十一世纪转基因技术将走向转基因系统生物技术 20XX年国际上重新提出 合成生物学概念，并定义为基于 系统生物学原理 基因工程和转基因技术。 1.转基因细胞学原理： (1)细胞周期及MPF：细胞周期可人工分成4个时期，分别为G1期、S期、G2期和M期。细胞在正常情况下，沿着G1-S-G2-M路线运转。S期为DNA合成期，M期为有丝分裂期，M期结束到S期开始之前为G1期，S期末到有丝分裂期(M期)为G2期。有丝分裂开启由成熟促进因子也叫M期促进因子(maturation/mitosism/meiosis promoting factor，MPF)调控，MPF在细胞分裂中呈周期性改变即分裂后逐步积累，到G2晚期达成高峰，由中期向后期转换时骤然消失。所以推测MPF是真核细胞M期一个基础调整物质，能引导细胞由间期向M期转变。MPF由蛋白激酶激活，存在于全部真核细胞中(包含减数分裂性细胞)。但并非全部细胞全部是周期中细胞，一些细胞在一定条件下能够脱离细胞周期进入G0期或分化为不分裂细胞，而且G0期细胞可经过诱导重新进入周期。 (2)经过MⅡ期卵母细胞转基因：MⅡ期卵母细胞MPF含量很高，能够诱导细胞核发生一系列改变包含核膜破裂(NEBD)和早熟染色体凝集(premature chromosome condensation，PCC)，处于减数分裂MⅡ期卵母细胞无核膜时间远远长于有丝分裂M期细胞。所以此时期卵母细胞可作为基因导入受体。据此1998年Anthonv等对逆转录病毒载体感染发育早期动物胚胎方法加以改善，用逆转录病毒载体注射MⅡ期卵母细胞，注射完成卵母细胞同获能后精子共同孵育后，体外发育至囊胚，再移植到母牛体内得到了转基因小牛。1999年Anthonv等又将精子和外源基因共孵育，然后将精子头部显微注射入MⅡ期卵母细胞，这两种方法共同之处全部是利用MⅡ期卵母细胞无核膜，外源基因易导入特点。 2.转基因胚胎学原理： (1)哺乳动物转基因胚胎学原理：精子和卵子只有发育成熟后，精卵相遇时才能完成受精过程。精子进入卵子后头尾分离，胞核出现核仁，形成核膜，头部膨大形成雄原核；同时卵子排出第二极体形成雌原核。通常来说雄原核比雌原核大。接着雌雄原核核膜消失，雌雄原核融合。随即细胞周期性卵裂，分裂球增加到32个时形成桑葚胚，进入子宫再发育至囊胚，以前胚胎细胞含有很强分化能力。从哺乳动物受精卵分裂发育规律来看，转基因操作时较适宜部位是受精卵雄原核，精子进入卵细胞后1小时，雄原核和雌原核还未融合，在显微镜下轻易看到雄原核。多数研究者在此时期把外源基因显微注射到雄原核，经过雌雄原核融合把外源基因整合入受精卵。有研究者认为，注射时间应选在精卵融合后受精卵有丝分裂S期进行，外源基因能够借助受精卵本身基因组DNA复制时形成缺口或缝隙及重组过程，整合到受精卵基因组中。 (2)禽类转基因胚胎学原理：家禽和哺乳动物相比其生殖生理特点有所不一样，家禽卵子在输卵管中碰到精子完成受精，可能有多个精子进入卵细胞，精子进入时，卵子处于第二次分裂中期。精子入卵后，卵子排出第二极体，此时二者分别形成雄原核、雌原核，然后雌雄原核融合，雄原核很快被包上一层脂粒。融合后受精卵在输卵管前移过程中一边分裂，一边形成卵清、蛋壳等，鸡蛋产出体外时，已发育到6 000个细胞囊胚期。因为单细胞期卵子不易取得，所以不宜对卵子进行基因操作。鸡卵子受精时有多个精子进入卵细胞，无法辨清哪一个精子和雌原核融合，且雄原核很快包上一层脂粒，所以也无法像哺乳动物那样对雄原核注射。所以鸡转基因操作，通常选择在刚产出蛋(即未孵蛋)胚盘进行注射，注射位置是受精卵胚盘中央质膜下方30μm处囊胚腔，靠近雌原核。 (3)鱼类转基因胚胎学原理：Ozato等(1986)曾将外源基因注射到V期卵母