第二章基因工程制药part.docxVIP

高效表达目标基因的战略和技术 表达质粒的优化和设计 共表达大肠杆菌稀有密码子tRNA基因 提高目标基因mRNA和目标基因产物的稳定性 高密度发酵和工程化宿主细胞 在各种表达载体中，启动子和SD序列的下游都设计了一 段含有各种限制性酶切位点的序列，用于目标基因的插 入。这一插入位点附近的序列将成为核糖体结合位点的 一部分，因此它对构建高效表达质粒是至关重要的。 由于每一个基因都具备各自独特的5 端结构，最终构建 成的各种表达质粒所具有的核糖体结合位点是一个变量。 6xHli 5 Stop Codons PT5 Stop Codons 三PSH -5 § 6xHte ? pQE-30 pQE-31 pQE-32 ? pQE-801 -- pQBeiL AC pQE-821 -G 构建表达质粒时首先要考虑使目标基因的翻译起始 密码ATG与SD序列之间的距离和碱基组成处于一个适 当的范围。 核糖体结合位点序列的变化对mRNA的翻译效率有 显著影响，  SD序列U AAGGAGG的翻译效率要比AAGGA高3~6 倍。 翻译起始密码ATG与U AAGGAGG的最适距离是6~8 个碱基长度，与AAGAA的最适距离是5~7个碱基长度。 ATG与UAAGGAGG至少相隔3~4个碱基，与 AAGAA至少相隔5个碱基mRNA的翻译才能进行。 ATG与SD序列之间的碱基组成为A、T碱基丰富时， mRN