第二章基因工程制药新版5.docxVIP

五、 五、 六、 七、 八、 九、 十、 第三节基因工程制药生产的基本过程 工具酶的分离纯化 载体的分离纯化 外源DN A和目的基因的分离和获得 夕卜源DNA与载体DNA的切割与连接 宿主细胞的选择和基因导入操作 基因工程菌的稳定性及生长代谢的特点 基因工程菌中试 基因工程菌的扩増和发酵生产 基因工程药物的分离和纯化技术 变性蛋白的复性 十一、基因工程药物的质量控制 十二、基因工程药物的制造实例 六.基因工程菌的稳定性及生长代谢的特点 （_）基因工程菌质粒的不稳定性 （二） 质粒稳定性的分析方法 （三） 质粒不稳定的原因 （四）提高质粒稳定性的方法 （五）基因工程菌的生长速率 （六）蛋白质产量/菌体数量比 （七） 能量供应与菌体生长的关系 （八） 小分子前体.催化剂供应与菌体生长的关系 w.■基因工程菌在传代过程中常出现质粒不稳 定的现象,有分裂不稳定和结构不稳定。 由于质粒不稳定导致的质粒丢失菌与含有 质粒的菌之间生产速率不一致导致可能的 生长优势,进而能在培养基中逐渐取代含 质粒菌成为优势菌群,从而减少基因表达 的产率,导致基因工程菌在生产过程中出 现不稳定现象。 w. (二)质粒稳定性的分析方法 (1)将工程菌堵养液样品适当稀释,均匀 涂于不含抗生素标记的平板培养基,培养 10-12h ,统计所长出的菌落数A ； (2 )然后随机挑选100个菌落,接种到含有 抗生素标记的平板