食品生物技术实验指导.doc

食品生物技术实验指导 实验一、微生物保藏菌种的活化 一.目的要求 学习各类菌种的活化方法。 二、实验器材：斜面菌种、接种环、酒精灯、三角瓶、试管、脱脂棉、纱布、棒绳、琼脂、高压蒸汽灭菌锅、电炉、锅、蛋白胨、牛肉膏、葡萄糖、氯化钠。 三、实验内容 斜面冰箱保藏菌种→接种环灼烧无菌→挑取一环菌苔→新鲜配置的斜面培养基→划线→恒温培养→菌苔长丰满后备用。 四、思考题 1.什么是菌种的活化？ 2.保藏菌种在使用时为何要活化？ 实验二、紫外线诱变 一.目的要求 通过本次实验课，使学生学会单细胞悬浮液的制备方法，掌握紫外线诱变的机理及具体操作。 二.实验器材：紫外线诱变箱、斜面菌种、接种环、酒精灯、三角瓶、试管、培养皿、玻璃珠、磁力震荡器、脱脂棉、纱布、棒绳、琼脂、高压蒸汽灭菌锅、电炉、三角瓶、水浴锅、蛋白胨、牛肉膏、葡萄糖、氯化钠。 三、实验内容 6ml 活 化 28℃2-3天 单胞悬液 无菌平皿 紫外线诱变 取诱变液1ml 2′ 无菌水9ml 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 1mlLl1mlLl1mlLl 1mlLl 1mlLl 1mlLl 1mlLl 分别加入无菌空平皿 倒入培养基 迅速摇匀 凝固后 恒温培养 形态变异观察 思考题 1.什么是诱变育种？ 2.紫外线诱变育种的机理是什么？ 实验三、PDA培养基的制备 一.目的要求 学习PDA培养基的配制的方法。 二.实验器材：菌种、接种环、酒精灯、三角瓶、试管、脱脂棉、纱布、棒绳、蒸锅、高压蒸汽灭菌锅、电炉、葡萄糖、琼脂、马铃薯。 三、实验内容 马铃薯去皮→称量20g→切条（或切块）→加1000ml水→煮沸30分钟→双层纱布过滤→取滤液→补足水分→加20g琼脂→加热融化→加20g葡萄糖→pH自然→趁热分装于三角瓶→121℃ 四、思考题 1.PDA培养基属于哪类培养基？ 2.配培养基时为何最后放入葡萄糖？ 3.PDA培养基适合培养哪一类细菌？ 实验四、乳酸菌发酵剂的制备 一.目的要求 学习乳酸菌发酵剂的制备方法。 二.实验器材：菌种、接种环、酒精灯、三角瓶、试管、脱脂棉、纱布、棒绳、琼脂、高压蒸汽灭菌锅、电炉、蛋白胨、酵母膏、葡萄糖、磷酸二氢钾、琼脂。 三、实验内容 奶管菌种 母发酵剂 中间发酵剂 生产发酵剂 纯菌种 四、思考题 酸凝乳的发酵机理是什么？ 实验五、.原生质体融合 一.目的要求 学习原生质体融合的方法 二、实验器材：斜面菌种、接种环、酒精灯、三角瓶、培养皿、移液管、试管、容量瓶、离心管、玻璃棒、显微镜、离心机等。 缓冲液(1) 0.1 mol/L pH 6.0 磷酸缓冲液。(2) 高渗缓冲液，于上述缓冲液中加入0.8 mol/L 甘露醇。(四) 原生质体稳定液(SMM)0.5 mol/L 蔗糖、20 mol/L MgC12、0.02 mol/L 顺丁烯二酸，调pH 6.5。(五) 促融剂40％聚乙二醇 (PEG)的SMM 溶液。三、实验内容 (一) 原生质体的制备1．活化菌体将酿酒酵母菌活化分别转接新鲜斜面。自新鲜斜面分别挑取一环接入装有25 mL 完全培养基的锥形瓶中，30℃培养16 h 至对数期。2．离心洗涤、收集细胞分别取5 mL 上述培养至对数生长期的酵母 细胞培养液，3000 r/min 离心 10 min，弃上清液，向沉淀的菌体中加入5 mL 缓冲液，用无菌接种环，搅散菌体，