《组织学基本技术》.ppt

组织学基本技术;内容提纲;1. 组织学（Histology）概念 研究机体的微细结构及其相关功能的科学。 2. 研究内容 是在细胞水平、亚细胞水平和分子水平上对机体进行研究。;二、组织学技术简介;显微镜技术;显微镜的发展史;根据光源不同，显微镜分为光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光为光源，后者则以电子束为光源。 —、光学显微镜 （一）普通光学显微镜 （二）荧光显微镜 （三）激光共聚焦扫描显微境 （四）暗视野显微镜 （五）相差显微镜 （六）偏光显微镜 （七）微分干涉差显微镜 （八）倒置显微镜 ;尼康E-600光学显微镜;尼康E800荧光显微镜 ;莱卡倒置显微镜 ;二、电子显微镜 透射电镜 扫描电镜 ;透射电镜;透射电镜标本制备步骤;扫描电镜标本制备步骤;显微组织标本的制备有多种方法，例如：切片法 （石蜡切片和冰冻切片）、涂片法、铺片法、 磨片法等。组织学中最常用的方法是石蜡切片法。;三、显微组织标本的制备;组织制片的意义和目的 组织制片技术是随着生命科学的发展而不断进步的。利用组织切片染色(staining)的方法所制出的标本显示了各种组织细胞的不同结构和形态，它们之间的相互连接及它们之中的某些化学成分的种类和含量的变化，为细胞分子学的研究提供了最直观的依据。因此，组织制片是研究医学和生物学的一个最基本和最重要的手段。;组织标本制作的方法 ;组织切片法：利用化学试剂将组织经过一系列的固定(fixation)、脱水、透明后，再利用石蜡或火棉胶和明胶等支持物渗透进组织内部，使组织保持一定的硬度，并包埋(embedding)成块，然后依靠切片机(microtome)将包埋好的组织块切成以微米计的薄片，再根据需要进行各种染色得到的供显微镜下观察的标本的方法。包括：石蜡切片、火棉胶切片、明胶切片，冰冻切片。;组织不经过切片手续制成的观察标本的方法为非组织切片法。包括：涂片、压片、铺片、磨片、消化分离、活体标本、整装标本、血管注射标本。 涂片：将所采的血液或骨髓样品涂抹于载玻片上经瑞氏或姬姆萨染色后的标本。 压片：先将组织处理成小块物质，然后经化学???品软化和染色，再用盖玻片压封于载玻片上的标本。例如运动终板等。 ;铺片：将需要观察的薄片组织用手工的方法直接铺于载玻片上，然后经过固定、染色等程序制成的标本。例如蛙的肠系膜铺片，大白鼠的皮下组织铺片等。 磨片：骨，牙齿等组织，不经脱钙和切片，直接在磨石上用手工磨成大约50微米左右的薄片，然后再进行染色封固在载玻片上的标本。 消化分离：将组织分离成小块，然后利用相应的化学药品水溶液将其细胞间质消化溶去，再用机械分离的方法，如利用水的震荡冲击力等，使小块组织分离成单个而又完整的细胞，经染色后涂于载玻片上封固的标本。例如平滑肌分离标本，脊髓的运动神经细胞等。;活体标本：将所采的观察标本加生理盐水后直接滴于载玻片上在显微镜下观察。 整装标本：一种是将胚胎或小动物经前期固定后整体封藏于盛满固定剂的透明容器中。另一种是将发育至某一阶段的鸡胚整体取出，经固定、染色、脱水、透明后封固于载玻片上的标本。 血管注射标本：一种是将有色物质注射进血管，用酸或硷将血管周围的组织腐蚀后做成的整体封藏的血管标本。另一种是将有色物质注射进血管后，经一系列制片技术处理后封固于载玻片上供显微镜下观察的标本。 ;切片：用于具有一定硬度的组织，例如肝、肾等;涂片: 用于液态组织，如血液，精液和唾液。;铺片: 用于很薄的组织，如肠系膜。;磨片: 用于很坚硬的组织，如骨和牙。;石蜡切片制作步骤;石蜡切片的制备;（二）固定; 单纯固定液 4%中性甲醛：用PH7.2-7.4的PBS配制，配制后密封、 4℃保存，保存时间不超过一个月。适用HE染色和免疫组化。 4%多聚甲醛：用PH7.2-7.4的PBS配制。 乙醇混合固定液 复合固定液 AF（乙醇-甲醛）固定液 Bouin固定液 Carnoy固定液 Zenker固定液;固定方法;固定注意事项;高效、方便、快捷的全自动形态检测平台！;（三）染色;镀银染色;苏木精;细胞爬片制作;细胞涂片制作;组织化学技术概念：应用化学反应或免疫学反应等原理检测组织和细胞的化学成分并进行定位、定量的技术。包括一般组织化学、免疫组织化学、原位杂交组织化学等。; 原理：组织细胞中的物质（核酸、糖类、脂类、蛋白质等）与相应试剂反应，最后形成有色终产物，通过有色终产物在细胞中的定位及颜色的深浅来判断某种物质在细胞中的分布和含量。 特点：能在组织学标本上，定位、定性和定量地显示分布于组织或细胞内某些物质。;① 糖类 ——过碘酸-Schiff反应（PAS反应） ② DNA ——福尔根反应