外植体及消毒演讲稿.ppt

接苗前，先烤瓶口，倒掉培养瓶存留的水珠，以防湿度大出现玻璃化。 切苗三字决“快、狠、准” .新. * 接苗是要注意瓶口冲向风源，尽量靠近风源，不能拉到怀里。 .新. * 4、工作区域污染 当在培养基上出现不同颜色的霉菌污染，就是因为无菌操作室和培养室的空气污染造成的，必须在接种前用紫外线或臭氧对空气进行消毒。 定期对接种室或培养室进行消毒。 对超净工作台用75%进行消毒，使用之前提前开机（风机、紫外线）；使用3月以上应对超净工作台的滤网进行检查。 .新. * 定义：外植体在诱导脱分化或再分化过程中，自身组织从表面向培养基释放褐色物质，以及培养基逐渐变成褐色，外植体也变褐至死亡的现象。 .新. * .新. * 2、玻璃器皿灭菌 干热灭菌：160-180℃,1.5-2.0h 湿热灭菌：121℃, 15-20min 接种前用酒精棉球擦试，并在酒精灯火焰上灼烧灭菌 .新. * 3、接种工具灭菌 ◆用前干热灭菌：160～180℃,1.5～2.0h ◆用前湿热灭菌：121℃, 15～20min ◆接种前用酒精棉球擦试，浸入75%酒精液中，并在酒精灯火焰上灼烧灭菌。 .新. * 4、实验服、口罩、滤纸灭菌 ◆湿热灭菌：121℃，15～20min ◆实验服灭菌后置于缓冲间或密封好。 .新. * 5、接种室灭菌 紫外灯照射（接种室、超净台、接种箱）；波长260nm，距离小于1.2m，15～20min。 、臭氧灭菌机：1～2h 、熏蒸灭菌：2ml/m3甲醛 + 0.2g/ m3 高锰酸钾；冰醋酸；1～3%高锰酸钾或3%来苏儿。 、接种台喷雾消毒：75%酒精。 .新. * 6、培养室灭菌 熏蒸灭菌： 2ml/m3甲醛 + 0.2g/m3 高锰酸钾 新建培养室用前一定要彻底熏蒸1次； 隔2-5天用洗衣粉水或来苏水拖地1次，用高锰酸钾擦架1次； 喷洒75%酒精灭菌降尘。 .新. * 消毒(Sanitization)：杀死、消除或抑制部分微生物，使之不发生作用。 消毒是减少微生物数量，使之达到安全或相对安全的水平，而与使用规定和使用目的相符合。 消毒是消灭采自繁殖形态的细胞的活微生物的污染，但它不保证灭菌。 消毒和灭菌是不可互换的术语。 .新. * .新. * 在选择一种消毒剂时，首先要了解消毒剂的性质，但同时又应认识到没有一种消毒剂是完全理想的。细菌学家建议理想的消毒剂应该具备以下九大特征。 .新. * ①能广谱地杀灭微生物； ②对人体无毒； ③无腐蚀性，对设备无污染； ④具有洗涤剂作用； ⑤具有稳定性； ⑥作用迅速； ⑦不因有机物的存在而失去活性； ⑧产生所期望的后效作用； ⑨廉价。 各种试剂都有优点和局限性，应选择一种试剂或几种试剂结合使用，以最低成本获得最大效果。 .新. * 75％酒精(Alcohol)溶液(体积分数) 酒精渗入细菌体内使细菌蛋白质凝固，而被杀死。 75%效果最好，使用最多，因为75%能凝固蛋白质，但不会行成包膜，能杀死。 高浓度酒精与细菌接触后，使其表面凝固行成包膜，阻碍了酒精凝固其内部蛋白，不能彻底杀死； 当酒精浓度低了也起不到相应的效果。 .新. * 75％酒精溶液配制及贮存 以配制一L 75%酒精为例。 1(L)*75%=95%*X，那么X=0.75/0.95=0.78947(L),即需要加入789.5(mL)95%的灯用酒精，同时加入210.5(mL)的三级水（配制培养基所用水）混合均匀即成。 为何选用95%酒精？ 贮存：密闭保存备用。原因何在？ .新. * 75％酒精溶液的使用 乙醇具有较强的穿透力和杀菌力，在外植体消毒时常作为表面消毒的第一步，时间常为30-45秒，具有浸润和灭菌双重作用，需要结合其他药剂灭菌才能达到彻底灭菌的作用。 .新. * 0.1%升汞溶液 升汞是有剧毒的重金属盐杀菌剂，原理在于Hg2+可与带负电荷的蛋白质结合，使菌体蛋白质变性失活。可有效杀死外植体表面的细菌和真菌芽孢，但需要无菌水冲洗5次以上，以清洗残留的汞。 注：1、灭菌后溶液，可倒回原液再次使用； 2、灭菌时间需要严格控制（原因）。 .新. * 0.1%升汞溶液的配制和贮存 以配制500mL 0.1%升汞溶液为例 准确称取0.5g升汞,加入预热至90度的500mL三级水中，混匀溶解。 封闭贮存，置于角落并在瓶壁上标注危险品标志。 .新. * 可根据具体实验的需要，查明其作用原理，配制、贮存、使用方法。 .新. * 前处理 获取外植体 酒精灭菌 氯化汞灭菌 无菌水冲洗 接种 .新. * 接种时由于有一个敞口的过程，是极易引起污染的时期，这一时期主要由空气中的细菌和工作人员本