动物微生物应用技术 免疫诊断与防治 血清学试验.pptVIP

* * * * * * 动物微生物应用技术 教 师：刘莎莎 血清学试验 一、血清学试验概述 由于抗体主要存在于血清中，所以将体外发生的抗原抗体结合反应称为血清学反应或血清学试验。 进行检测机体的体液免疫或进行传染病的免疫学诊断。 主要用已知抗原检测免疫动物血清中的特异性抗体，或以已知抗体检验相应抗原。 一、血清学试验概述 一、血清学试验概述 按照参加反应的抗原、抗体性质、反应原理、结果不同可分为： 沉淀试验； 凝集试验； 补体参与的实验； 中和试验； 标记抗体技术。 免疫学检测技术的基本原理 免疫学检测技术的基本原理 免疫学检测技术的基本原理 一、血清学试验概述 按照参加反应的抗原、抗体性质、反应原理、结果不同可分为： 沉淀试验； 凝集试验； 补体参与的实验； 中和试验； 标记抗体技术。 抗原-抗体反应的一般规律： 1.特异性与交叉反应； 2.表面化学基团之间的可逆结合； 3.适宜的抗原抗体比例； 4.抗原抗体反应的阶段性： 1）抗原抗体特异性结合阶段 2）可见反应阶段 一、血清学试验概述 1、特异性与交叉反应： 高度特异性：抗原表位与抗体分子CDR的互补结合是抗原-抗体反应的化学本质。 一、血清学试验概述 交叉抗原：不同抗原物质之间可能存在有共同的抗原决簇，这些共有的抗原组成或决定簇称为共同抗原或交叉抗原。交叉反应：如果两种不同的抗原物质之间存在相同的抗原决定簇，则一种抗原可以与另一种抗原物质刺激机体产生的抗体之间相互发生结合反应。　　 2、表面化学基团之间的可逆结合： 抗原与相应抗体除空间构型具有互补性外，两者主要是通过分子表面的氢键、疏水键、静电和范德华力非共价结合。 亲合力: 指抗体分子的抗原结合部位与抗原表位之间的结合强度。 一、血清学试验概述 在一定浓度范围内，二者比例合适，可出现肉眼可见的反应物； 若比例不合适，即抗原或抗体过剩时，可形成小分子抗原-抗体复合物。此种小分子复合物多呈游离状态，不能为肉眼所见。 3、适宜的抗原抗体比例： 一、血清学试验概述 4、抗原-抗体反应的两个阶段 ① 抗原-抗体特异性结合阶段： 特点：反应快，数秒钟至几分钟内完成。 ② 反应可见阶段： 特点：所需时间较长，从数分钟、数小时到数日不等，且受电解质、温度和酸碱度等因素影响。 一、血清学试验概述 1.电解质： 在电解质作用下，抗原-抗体复合物失去较多负电荷，使彼此连接出现肉眼可见的凝集或沉淀现象。 试验中常用0.85%的NaCl溶液作为稀释液，提供适当浓度的电解质。 抗原-抗体反应的影响因素 一、血清学试验概述 提高浓度可增加抗原与抗体分子碰撞机会，加速抗原-抗体复合物的形成。 通常抗原-抗体反应的最适温度是37℃。 2.温度 3.酸碱度 抗原-抗体反应的最适pH值在6-8之间。 pH过高或过低，均可影响抗原或抗体的理化性状，影响试验的可靠性。 一、血清学试验概述 二、常见血清学实验 可溶性抗原（沉淀原）与相应的免疫血清（沉淀素），在有电解质的环境中，比例适合时，经过二步反应，将出现肉眼可见的沉淀现象。 环状沉淀试验—毛皮中炭疽杆菌抗原； 免疫扩散试验； 双向琼脂扩散 单项琼脂扩散 免疫电泳试验； 对流免疫电泳 琼脂免疫电泳 火箭电泳 （一）沉淀试验 二、常见血清学实验 颗粒性抗原（凝集原：细菌、红细胞等）与阳性抗体（凝集素）在电解质存在下，比例适合时，经过二步反应，将出现肉眼可见的颗粒抗原凝集现象。 玻片凝集试验—细菌鉴定和血型鉴定； 试管凝集试验—凝集效价； 间接凝集试验—红细胞； （二）凝集试验 病毒颗粒 红细胞 某些病毒（如流感病毒）表面的血凝素（HA）能引起人或某些哺乳动物的红细胞发生凝集。 血凝现象 红细胞凝集现象 二、常见血清学实验 （二）凝集试验 病毒颗粒 红细胞 病毒抗体 病毒液中若先加入病毒的特异性抗体，抗体与病毒表面的抗原特异性结合，从而抑制病毒与红细胞的血凝现象，称为红细胞凝集抑制试验。 红细胞凝集抑制现象 二、常见血清学实验 （二）凝集试验 二、常见血清学实验 补体与抗原抗体的结合物结合后，直接引起可见的溶血反应或溶菌反应等； 补体与可溶性抗原抗体复合物结合后，不出现可见现象，需通过红细胞—溶血素这一指示系统测定补体是否已结合，从而间接地检测是否存在抗原抗体反应。 （三）补体参与的试验 二、常见血清学实验 在体外孵育病毒与特异性抗体的混合物，使病毒与抗体相互反应，再将混合物接种到敏感的宿主体内，经培养后观察CPE或红细胞吸附现象是否消失，即特异性抗体是否中和相应病毒，从而测定残存的病毒感染力的一种方法。 （四）中和试验 二、常见血清学实验 指用荧光素、酶或放射