KRAS和EGFR检测与临床应用[借鉴].pptVIP

应用于Real time-PCR的ARMS-PCR G C A T G A A G G allele A allele 5’ 5’ 5’ 5’ 3’ 3’ 3’ 3’ AS primer AS primer Mismatch Mismatch Reverse primer Reverse primer FAM-5’ 3’-BHQ1 FAM-5’ 3’-BHQ1 Probe Probe * 精品ppt·实用可编辑 ARMS技术特点 优点： 灵敏度高（0.1-1%） 操作简便 周期短 不产生PCR产物污染 适用样本类型多（如FFPE） 精确突变类型 缺点： 方法建立需时较长 仅能检测已知突变 * 精品ppt·实用可编辑 测序法与ARMS法相比较 Sanger测序法 焦磷酸测序 ARMS 敏感度 10-20% 5-10% 1% FFPE标本成功率 低 较高 高 商用试剂盒 无 有 有 流程与速度 1-2天 2-3天 1天 数据分析要求 高 高 低 试剂成本 低 低 略高 仪器成本 高 高 低 * 精品ppt·实用可编辑 操作流程及数据解读 * 精品ppt·实用可编辑 检测流程与质量控制 标本准备 DNA抽提 突变检测 分析报告 标本种类 标本量 SOP OD 260/280 （新鲜组织） qPCR （FFPE） SOP 阳性及阴性对照 问题及解决 SOP 报告标准 判读形式及检查 * 精品ppt·实用可编辑 使用ARMS的KRAS突变检测试剂盒 试剂盒 公司 密码子 位点个数 检测技术 TheraScreen assay Qiagen codon12、13 7个重要突变 ARMS-PCR和蝎形探针技术 KRAS检测试剂盒 厦门艾德 codon12、13 7个重要突变 ARMS-PCR和双环探针技术 人K-RAS基因7种突变检测试剂盒 上海透景 (Tellgen) codon12、13 7个重要突变 ARMS-PCR和Taqman探针技术 人类KRAS基因7种突变检测试剂盒 武汉友芝友 Codon12、13 7个重要突变 ARMS-PCR荧光探针法 人KRAS基因突变检测试剂盒 苏州工业园 codon12、13 4个突变 ARMS-PCR和Taqman探针技术 * 精品ppt·实用可编辑 使用ARMS的EGFR突变检测试剂盒 DxS ARMS ADx ARMS 友芝友 生产厂商 英国DxS公司(Qiagen) 厦门艾德公司 武汉友芝友 引物与探针设计 蝎形引物与探针 双环引物与探针 特异性引物和探针 检测突变种类 29种 29种 29种 突变判读 FAM信号, ΔCt值 FAM信号, Ct值 FAM信号, Ct值 DNA用量 20ng 10ng 20ng样本中检测1%突变 适用qPCR机型 Stratagene Mx系列, ABI系列 Stratagene Mx系列, ABI系列, Lightcycler480 Stratagene Mx3000P, ABI7500, Lightcycler480等 * 精品ppt·实用可编辑 等位特异性引物设计 * 精品ppt·实用可编辑 KRAS基因序列和常见突变 KRAS序列：atgactgaatataaacttgtggtagttggagctggtggcgtaggcaagagtgccttgacgatacagctaattcagaatcattttgtggacgaatatgatccaacaatagaggattcctacaggaagcaagtagtaattgatggagaaacctgtctcttggatattctcgacacagcaggtcaagag 常见突变： Codon 12 Codon 13 Gly12Ser GGTAGT Gly13Ser GGCAGC Gly12Arg GGTCGT Gly13Arg GGCCGC Gly12Cys GGTTGT Gly13Cys GGCTGC Gly12Asp GGTGAT Gly13Asp GGCGAC Gly12Ala GGTGCT Gly13Ala GGCGCC Gly12Val GGTGTT Gly13Val GGCGTC * 精品ppt·实用可编辑 精品ppt·实用可编辑 精品ppt·实用可编辑 精品ppt·实用可编辑 精品ppt·实用可编辑 精品ppt·实用可编辑 精品ppt·实用可编辑 精品ppt·实用可编辑 精品ppt·实用可编辑 精品ppt·实用可编辑 精品ppt·实用可编辑 精品ppt·实用可编辑 精品ppt·实用可编辑 精品ppt·实用可编辑 精品ppt·实用可编辑 精品ppt·实用可编辑 精品ppt·实用可编辑 精品ppt·实用可编辑 精品ppt·实用可编辑 精品ppt·实用可编辑 精品ppt·