NRG1HER3通路激活致HER2阳性乳腺癌曲妥珠单抗原发耐药作用机制的研究.docxVIP

NRG1/HER3通路激活致 HER2阳性乳腺癌曲妥珠单抗原发耐药作 用机制的研究 目的 : 探索 HER2阳性乳腺癌中 ,NRG1/HER3通路激活在曲妥珠单抗原发耐药 机制中的意义 , 以及 NRG1依赖性 HER3单克隆抗体 (3D4) 的抑制效果。选用 BT474(曲妥珠单抗敏感 ) 和 MDA-MB-453(曲妥珠单抗原发耐药 )HER2阳性乳腺癌 细胞为研究对象 , 利用曲妥珠单抗和 / 或 HER3抗体阻断 HER2/HER3激活 , 利用 siRNA 沉默 HER3基因 , 分析不同处理后下游信号转导分子和细胞凋亡、 活力的变 化规律 , 阐明 NRG1/HER3激活在曲妥珠单抗原发耐药中的重要作用。 方法 :1. 通过 外源性 NRG1刺激 , 曲妥珠单抗和 / 或 HER3抗体处理敏感 BT474细胞和耐药 MDA-MB-453细胞后 , 利用 western blot 方法检测 p-HER2、p-HER3、p-Akt 、pMAPK 信号通路的蛋白表达量。 把小干扰 RNA(靶向 HER3基因 ) 转染至耐药 MDA-MB-453细胞中进行基因沉 , 利用 western blot 方法检测 p-HER2、p-HER3、p-Akt 、p-MAPK表达的变化。 通过外源性 NRG1刺激 , 曲妥珠单抗和 / 或 HER3抗体处理敏感 BT474细胞与耐药 MDA-MB-453细胞后 , 应用流式技术检测细胞早凋。 4.MTT法检测不同药物和不同 浓度的刺激对敏感 BT474细胞与耐药 MDA-MB-453细胞活力的影响。 结果 :1. 敏感 BT474细胞 , 无 NRG1刺激时 , 曲妥珠单抗显著下调 p-HER2的表 达 , 促进细胞凋亡 , 降低细胞活力 (Plt;0.01) 。2.NRG1刺激后 , 曲妥珠单抗对 BT474的抑制作用减弱 ,HER3抗体显著下调 pHER3及其下游信号分子的表达 (Plt;0.01) 。3.NRG1刺激后 ,HER3抗体显著下调 MDA-MB-453细胞 p-HER2、 p-HER3及其下游信号分子 p-Akt 和 p-MAPK的表达 , 曲妥珠单抗并未发挥显著下 调作用 (Plt;0.01) 。 4.MDA-MB-453细胞在进行 HER3基因沉默后 ,p-HER2、p-HER3、p-Akt 和 pMAPK 的表达与对照组相比显著下调 (Plt;0.01) 。5.NRG1依赖性 HER3抗体能够提高 敏感 BT474细胞和耐药 MDA-MB-453细胞早凋比例。 6.NRG1依赖性 HER3抗体联 合曲妥珠单抗刺激敏感 BT474和耐药 MDA-MB-453细胞后 , 可协同抑制细胞活力。 结论 :1. 在敏感 BT474乳腺癌细胞中 ,NRG1/HER3的激活抵消了曲妥珠单抗的 抑制作用。 2. 在耐药 MDA-MB-453乳腺癌细胞中 ,NRG1依赖性 HER3抗体通过抑制 pHER2、p-HER3、p-Akt 、 p-MAPK信号通路的激活逆转曲妥珠单抗耐药。 3.MDA-MB-453细胞进行 HER3基因沉默后 , 相关信号分子 p-HER2、p-HER3、p-Akt p-MAPK的变化同 NRG1依赖性 HER3抗体作用后变化趋势一致 , 证实了 HER3抗 体的有效性。 4.NRG1依赖性 HER3抗体能够促进敏感 BT474细胞和耐药 MDA-MB-453细胞早凋 , 降低细胞活力。 5.HER3单克隆抗体联合曲妥珠单抗协同抑制 HER2阳性乳腺癌细胞活力 , 可作为曲妥珠单抗原发耐药的治疗选择。