临床生物化学检验技术 任务三 糖代谢紊乱检测项目 血清(浆)葡萄糖测定（实验）.pptVIP

* 红色醌亚胺色素与样本中葡萄糖的浓度成正比。 * 本实验线性：10～1000U/L。若结果超过该线性范围,用0.9%的生理盐水稀释样品，重新测试，结果乘以稀释倍数。 * 血清(浆)葡萄糖测定 天津市人民医院 宋志荣 简 述 血液中的葡萄糖称为血糖。血糖是维持细胞功能的必需能量供体，是以糖酵解的形式降解。血糖测定是临床生化检验中历史最久、占日常工作量比重较大的项目之一。 测定血糖的方法很多，可分为三大类：氧化还原法、缩合法及酶法。我国推荐的方法是葡萄糖氧化酶法。 原 理 葡萄糖氧化酶（glucose oxidase, GOD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。 葡萄糖 + O2 + H2O GOD 葡萄糖酸 + H2O2 原 理 过氧化物酶( peroxidase, POD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。可在500nm波长处进行吸光度测定，从而计算出葡萄糖的浓度。 H2O2 + HBA + 4-安基安替比林 POD 醌亚胺色素 (红色) + H2O 试剂与仪器 试剂主要成分： R1：过氧化物酶 375u/L 4-羟基苯甲酸 15mmol/L 4-氨基安替比林0.75mmol/L 磷酸盐缓冲液110mmol/L. R2：葡萄糖氧化酶60000u/L 磷酸盐缓冲液 110mmol/L， 含非反应性填充物及稳定剂 试剂与仪器 试剂的储藏和稳定性： 原装试剂在2-8℃避光保存，有效期12个月。 启用后试剂在2-10℃可稳定30天。 若试剂混浊，或以水为空白在500nm处吸光 度值大于0.3A，则不能使用。 仪器 ：半自动生化分析仪 全自动生化分析仪 操作步骤 实验参数：全自动分析法：终点法 反应方式：END UP 实验波长：500nm 空白读点：0 测定读点：31-33 样品量：2.0μl 定标方式：LINEAR R1试剂量：200μl R1位置：A-8 R2试剂量：100μl R2位置：A-8 吸光度变化：UP 单位：mmol/L 葡萄糖氧化酶法测血糖操作步骤 加入物（ml） 空白管 标准管 测定管 血清 — — 0.01 葡萄糖标准应用液 — 0.01 — 蒸馏水 0.01 — — 酶酚混合试剂 1.0 1.0 1.0 混匀，置37℃水浴中，保温15min，在波长500nm 处比色，以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度。R1: R2=2:1 半自动操作法：终点法 计 算 葡萄糖浓度（mmol/L）=(样本管吸光度/校准管吸光度)×校准液浓度（mmol/L） 生物参考区间： 空腹血清葡萄糖为3.90～6.10mmol/L 危急值：≤2.2 mmol/L或≥30 mmol/L 临床意义 生理性或暂时性高血糖：可见餐后1～2h，摄入高糖食物 后、或情绪紧张肾上腺分泌增加时。 病理性高血糖 1.糖尿病: 病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的 糖尿病患者。 2.内分泌腺功能障碍: 甲状腺功能亢进，肾上腺皮质功能 及髓质功能亢进。 3.颅内压增高剌激血糖中枢。 4.脱水引起的高血糖: 如呕吐、腹泻和高热等也可使血糖 轻度增高。 临床意义 生理性低血糖：见于饥饿和剧烈运动。 病理性低血糖(持发性功能性低血糖最多见，依次是药源性、肝源性、胰岛素瘤等) 胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等，使胰岛素分泌过多 对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退、肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长素、肾上腺皮质激素分泌减少。 严重肝病患者，由于肝储存糖原及糖异生等功能低下，肝不能有效地调节血糖。 注意事项 一般浓度的抗凝剂或防腐剂如肝素、EDTA、柠檬酸盐、草酸盐、氟化物、和碘乙酸等不干扰测定。 过氧化物酶的特异性要比葡萄糖氧化酶特异性低得多。一些还原性物质，如尿酸、抗坏血酸、胆红素和谷胱甘肽等，可与还原性物质竞争过氧化氢，从而消耗反应过程中所产生的过氧化氢，产生竞争性抑制，使测定结果偏低。 样本中若含有异常高水平的胆红素和维生素C可对测定结果产生负干扰。 标本采集与要求 标本采集：建议 带分离胶的真空采血管，并及时