富含n-3多不饱和脂肪酸的肠外营养对脓毒症免疫功能保护作用的实验研究.docxVIP

富含 n-3 多不饱和脂肪酸的肠外营养对脓毒症免疫功能保护作 用的实验研究 脓毒症是指由感染引起的全身炎症反应综合症 (systemic inflammation response syndrome, SIRS), 进一步可发展为严重脓毒症、脓毒症休克。近年来 其发病率和死亡率仍居高不下 , 脓毒症死亡率接近 20%,而脓毒症休克死亡率更 是高达 60%。 脓毒症由于初始阶段过度的全身炎症反应综合症 (SIRS) 和相伴随的代偿抗 炎反应综合症 (Compensatory anti-inflammatory response syndrome,CARS), 严重扰乱机体正常的免疫平衡状态。反之 , 严重的免疫功能紊乱又将影响感染的 控制和机体对已发生的病理生理反应的调控。 免疫功能障碍与脓毒症发展及预后不良密切相关 , 适时制定相应的免疫调控 策略 , 可能为改善脓毒症治疗开辟新的途径。鱼油脂肪乳富含 n-3 多不饱和脂肪 酸 (n-3 Polyunsaturated Fatty Acids, PUFAs) 如二十碳五烯酸 (Eicosapntemacnioc acid, EPA) 和二十二碳六烯酸 (Docosahexaenoic acid, DHA),而大豆油脂肪乳主要含 n-6 PUFAs如花生四烯酸 (Arachidonic acid, AA)。 研究发现富含鱼油的肠外营养治疗具有抑炎、免疫调理作用 , 但是否改善脓 毒症的预后目前尚存争议。 此外 , 对于 n-3PUFAs如何发挥免疫调理作用的机制仍 未完全明确。 在本课题中 , 我们首先行盲肠结扎穿孔 (Cecal ligation and puncture,CLP) 制作大鼠脓毒症模型 , 给予含鱼油或大豆油的肠外营养治疗 5 天, 观察对生存率 的影响和重要脏器病理改变以及局部和全身细菌负荷变化；在此基础上 , 探究 n-3PUFAs对脓毒症免疫功能和炎症反应的影响 , 并进一步探讨 n-3PUFAs改善脓 毒症免疫功能和炎症调理作用的可能机制；为富含 n-3PUFAs的肠外营养治疗脓 毒症奠定理论基础 , 并进一步指导临床应用。全文共分三部分：第一部分 n-3 PUFAs对脓毒症大鼠生存率和重要脏器细菌负荷的影响目的： 建立脓毒症肠外营 养治疗模型 , 观察 n-3 PUFAs 对生存率、重要脏器病理改变和细菌负荷的影响。 方法： SD大鼠随机分为四组：假手术对照组 (Sham group, n=10), 行假手术 处理后自由饮食；生理盐水组 (NS group, n=20), CLP 制作脓毒症模型后接受静 脉输注生理盐水 5 天；大豆油组 (SO group, n=20), CLP 制作脓毒症模型后接受 含大豆油的肠外营养治疗 5 天；鱼油组 (FO group, n=20), CLP 制作脓毒症模型 后接受含鱼油的肠外营养治疗 5 天。每日定时记录 CLP术后 5 天内各组体重和生 存情况；取肺脏、脾脏行病理检查 , 比较病理评分；取腹腔灌洗液、肺、肾、和 脾脏行细菌培养 , 计数菌落数。 结果：成功建立脓毒症大鼠肠外营养治疗的模型； 脓毒症大鼠体重较对照组 明显下降 ,NS 组下降最明显 , 但鱼油组与大豆油组无明显差异；脓毒症大鼠存活 率明显下降 ,FO 组较 NS组生存率改善 (65% vs 25%, plt;0.05), SO 组与 NS组 无明显差别 (45% vs 25%,pgt;0.05) 。鱼油减轻了脓毒症对肺脏、 脾脏病理损害 , 降低了相应的病理评分；同时腹腔灌洗液、肺、肾、脾细菌菌落数较 NS组和 SO 组明显减少。 结论：富含 n-3 PUFAs 的肠外营养治疗提高了脓毒症大鼠的存活率 , 减轻了 重要脏器的病理损害和降低了细菌负荷 , 可能与细菌清除能力增强有关。第二部 分 n-3 PUFAs 对脓毒症免疫功能的保护和炎症调理作用的研究目的：探讨 n-3PUFAs对脓毒症免疫功能的影响及其炎症调理作用。 方法：实验分组和处理因素同第一部分；流式细胞术检测外周血和脾脏 CD3+T细胞、CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞比例、 (CD4+/CD8+T细胞比值变化 , 以及 CD4+CD25high Treg占 CD4+T细胞比例和绝对数变化； RT-PCR检测脾脏单 个核细胞 Foxp3 mRNA表达 , 蛋白免疫印迹 (western-blot) 方法检测 Foxp3 蛋白表 达； ELISA 法检测血浆 IL-10, HMGB1 浓度。结果：脓毒症导致外周血、脾脏主 T 淋巴细胞亚群比例紊乱 ,CD3+T细胞、 CD3+CD4+T细胞比例下降 ,CD4+/CD8+T 细胞比值降低； FO组血 CD3+C