食品微生物技术 酵母菌 血球计数板计数法.ppt

情境：微生物计数 任务：血球计数板酵母菌计数 知识点：血球计数板计数法 课程：食品微生物技术 血球计数板的构造 1.血球计数板的构造 一、血球计数板的构造 一、血球计数板的构造 每块计数板由H形凹槽分为2个同样的计数池。计数池两侧各有一支持柱，将特制的专用盖玻片覆盖其上，形成高0.10mm的计数池。计数池画有长、宽各3.0mm的方格，分为9个大方格，每个大格面积为1.0mm2，容积为0.1mm3（μL）。 以25×16型为例，中央大方格用双线分成25个中方格，位于正中及四角5个中方格是红细胞计数区域，用单线划分为16个小方格。根椐国际标准局（NBS）规定，大方格每边长度允许误差为±1%。 血球计数板结构 16中格 血球计数板结构 25中格 一、血球计数板的构造 血球计数板的计数原理 一、血球计数板的计数原理 如右图：中间有五个浅红色区域的大方格中有400个小格（小格25×中格16=400），对应的体积为0.1mm3，假如右图中五个浅红色区域中有细胞n个，那么，400格就应该有（n/80×400=)5n个细胞，那么，1mm3体积的细胞就应该是5n/0.1，换算成1ml中的细胞个数，就是5n/0.1×1000。如果取样液体是稀释过的，最后要乘以稀释倍数。? 计数板工作原理 血球计数板的计数方法 一、血球计数板的计数方法 1.视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。 2.取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。 显微镜下的计数板 一、血球计数板的计数方法 3.将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。 计数板模拟图 一、血球计数板的计数方法 4.静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。 计数板原理 一、血球计数板的计数方法 5.计数时若计数区是由16个中方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个中方格（即100小格）的菌数。如果是25个中方格组成的计数区，除数上述四个中方格外，还需数中央1个中方格的菌数（即80个小格）。 如菌体位于中方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。 计数原则 一、血球计数板的计数方法 6.对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2～3次，按公式计算出每mL（g）菌悬液所含细胞数量。 7.测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。 25个中格计数板计算公式： 16个中格计数板计算公式： 二、血球计数板计算