朊病毒结构研究应用和致病机理分析.doc

朊病毒结构研究和致病机理分析 摘要 朊病毒病是人和动物一个退行性脑病，关键包含羊骚痒病，疯牛病，和人克雅氏综合症等。其致病因子被认为是一个由正常细胞PrP蛋白经非正常折叠所形成蛋白质（PrPsc）。PrPsc和PrPc来自于同一基因含有相同氨基酸序列，但在二级结构和三级结构上有很大不一样。科学界认为朊蛋白是一个不含核酸和脂类疏水性糖蛋白 关键词：朊病毒 PrPc PrPsc 重组朊蛋白 高级结构 朊病毒（Prion Protein , PrP）是一个蛋白质亚病毒，是只有蛋白质而没有核酸病毒，形态特征为小型蛋白质颗粒，大约有250个氨基酸组成，大小仅为最小病毒1%。它是由动物机体中高度保守朊病毒蛋白基因编码蛋白质并能在机体多个细胞中表示，在中枢神经系统及神经元细胞中表示量最高。朊病毒含有两种不一样分子构象：一个是存在于正常机体或感染动物细胞中，没有致病作用，称为细胞朊蛋白（PrPc）,另一个是仅存在于感染动物细胞中，称为朊病毒蛋白（PrPsc）。两种蛋白一级结构完全相同，但二极结构及高级结构则有着显著差异。此种病毒可造成库鲁病（Ku-rmm）、克雅氏综合症（CJD）、格斯特曼综合症（GSS）、致死性家族失眠症（FFI）等常见人类疾病和羊瘙痒病和疯牛病等动物疾病[1]。朊病毒传输路径包含：使用动物肉骨粉饲料、牛骨粉汤；医源性感染，如使用脑垂体生长激素、促性腺激素和硬脑膜移植、角膜移植、输血等。朊病毒特点是耐受蛋白酶消化和常规消毒作用，因为它不含核酸，用常规PCR技术还无法检测出来。 朊病毒复制并非以核酸为模板，而是以蛋白质为模板。斯坦利因为发觉PrPSC（一普里朊）和PrPC含有相同一级结构而含有不一样二级和三级结构，打破了以往蛋白质一级结构决定高级结构定律，而取得了1997年诺贝尔生理学或医学奖[2]。 1982年普鲁宰纳提出了朊病毒致病“蛋白质构象致病假说”，以后魏斯曼等人对其逐步完善。其关键点为： 1、朊病毒蛋白有两种构象：正常型PrPc和致病型PrPsc，二者关键区分在于其空间构想上差异。PrPc仅存在α螺旋，而PrPsc有多个β折叠存在，后者溶解度低，且抗蛋白酶解；2、PrPsc可胁迫PrPc转化为PrPsc，实现自我复制，并产生病理效应； 3、基因突变可造成细胞型PrPc中α螺旋结构不稳定，至一定量是产生自发性转化，β片层增加，最终变为PrPsc型，并经过多米诺效应倍增致病[3]。 朊病毒一级结构 PrP前体全长为253个（人）～264个（牛）氨基酸，分子质量为33～35KD。 PrP前体N端22个疏水氨基酸残基为信号肽序列。C端23个（人为22个）疏水氨基酸残基是糖基磷酸肌醇结合位点（GPI）。这两部分将经过翻译后修饰水解除去，所以人成熟PrP仅为中间第23位～第231位氨基酸共209个残基组成序列。N端23～95位氨基酸残基之间有一个富含组氨酸和甘氨酸八肽反复区（PHGGGWGO）（51～91位氨基酸），第96～112位氨基酸序列是PrP结构控制区，113～135位有一段跨膜区，135～231位之间是3个束状螺旋区域[4]。 成熟PrP分子有两个N型糖基化位点，分别为第181位和第197位两个天冬酰胺（Asn）残基，在第179位和第214位两个半胱氨酸（Cys）残基之间有一个二硫键，第183位和第192位2个苏氨酸（Thr）磷酸化序列一致，第145位酪氨酸（Tyr）被硫化，第155位酪氨酸是其磷酸化位点之一（除灵长类及啮齿类动物之外），第147位～第163位氨基酸之间有一芳烃回文序列。 另外PrP含有3组不一样短肽反复，第一组为6肽反复结构；第二组为8肽反复结构（PHGGGWGQ）（其中第一个反复是9肽：PQGGGGWGQ）；第三组是2个肽串联反复，和前面所提到芳烃回文序列部分重合，全部这些反复似乎为PrP独有[2]。 研究发觉PrP序列中糖基化位点，形成二硫键Cys位点和疏水跨膜区最为保守。其次为N端信号肽水解位点，C端糖基磷酸肌醇结合位点（GPI）和α螺旋结构区域序列，八肽反复序列极为保守，均为P（H/Q）GGG（G/-）WGQ，但不一样物种之间反复拷贝数有所不一样。PrP经过蛋白酶K水解后，其正常PrPc被完全水解掉，而有侵染特征PrPsc则被水解掉N端67个氨基酸残基和C端25个氨基酸，变为分子质量只有27～30KDPrP27～30。据研究推测蛋白酶KN端切点在富含G八肽反复区域，在89～90位点G-W间肽键断裂。这种含有抗蛋白酶K功效PrP27-30（PrP-res）出现被认为是朊蛋白病毒致病关键[5]。通常认为PrPc三维结构形似“风筝”，其N端存在着缺乏有序结构片段，这一结构片段高度柔顺，能够在溶液中随意摆动，如同风筝“尾巴”，在其C端则含有3个α螺旋，2个反向平行β-折叠及一个二硫键，有多处