挥发性脂肪酸的测定种方法.docVIP

挥发性脂肪酸的测定 一般来说， 碳原子数在 10 以下的脂肪酸大部分具有挥发性， 并且易溶于水。 在它们 中间，随着碳原子数的增加，挥发性逐渐下降。典型的挥发酸见附表 5。 附表 5 低级脂肪酸的分子式及沸点 名称 分子式 沸点 /℃ 名称 分子式 沸点 /℃ 甲酸 HCOOH 100.8 丁酸 C3H 7COOH 162.3 乙酸 CH 3COOH 117.5 戊酸 C4H 9COOH 185.5 丙酸 C2H5COOH 140.0 已酸 C5H11COOH 205.0 挥发性脂肪酸易被微生物利用。在有机物的厌氧分解中，挥发性脂肪酸是作为生物 代谢的中间或最终产物而存在。在厌氧发酵的液化产酸阶段，这一类低级脂肪酸是这一 阶段的主要产物，其中以乙酸为主。在某种条件下，乙酸可以达到该类酸总量的 80%。 在 CH4 形成过程中，甲酸和乙酸是形成甲烷的重要前体物。据研究，自然界有机物产生的 CH4 中大约有 70%上由乙酸中的甲基原子团形成的。丙酸、丁酸可以转化成甲酸。有机酸过多往往反映出发酵池的病态。因此可以认为，在微生物厌氧发酵过程中，挥发性 脂肪酸不仅是一种不可缺少的营养成分，更重要的意义在于这类有机酸已是沼气发酵研 究有机物降解工艺条件优劣的重要参数，在甲烷形成的研究和生产中，它们的含量也是 重要的参数。 在挥发性脂肪酸的总量测定中， 是以乙酸作为基数进行计算， 除了要求测定总量外， 对甲酸、乙酸等各种低级脂肪酸的分别定量分析也是十分重要的。 C2～ C5 挥发性脂肪酸的气相色谱测定法 2.5.1.1 测定原理 使用色谱仪上的氢火焰检测器测定挥发性脂肪酸含量，其基本原理是：色谱柱分离 后馏出的物质被载气载入检测器离子室的喷嘴口，与燃烧气—氢气相混合，并以空气助 燃气进行燃烧，以此为能源，将组分电离成离子数目相等的正离子和负离子（电子）。 在离子室内装有收集极和底电极，因此离子在电场内作定向流动，形成离子流。该离子 流被收集极收集后，经过微电流放大器放大输送给记录仪得到信号，此信号的大小代表 单位时间内进入检测器火焰的组分含量。 2.5.1.2 测定条件 ⑴试剂设备 ① 乙酸、丙酸、丁酸、戊酸混合标准液的配制。 分别吸取乙酸（ A.R.，相对密度 1.045， 含量 99%）、丙酸（A.R.，相对密度 0.9987，含量 99.5%）、丁酸（ A.R.，相对密度 0.8097， 含量 99%）、戊酸（ A.R.，相对密度 0.934，含量 100%）各 25 μL于 50mL 容量瓶中，再 加入 2.5mL 甲酸（ A.R.，相对密度 1.22，含量 88%），最后用蒸馏水定容。其中乙酸、 丁酸、戊酸的浓度分别为 517 μ L/L 、 497 μ L/L 、 401 μ L/L 、 467 μ L/L 。 ② 6mol/ L 硫酸的配制：将 167mL 浓硫酸（相对密度 1.84）缓慢倒入 833mL 蒸馏水 中。 ③ 甲酸：相对密度 1.22，含量 88%。 ④ 离心机 4000～16000r/min。 ⑤ 气相色谱仪， FID 检测器。 ⑵ 样品预处理 用沼气发酵液 7mL 加入 2 滴 6mol/ L H 2SO4 使 pH 值降至 3.5 左右 （用 pH 试纸粗测），离心 20～30 min，取上层透明清液 3mL，加入 0.15 mL 浓甲酸，最 终 pH 值为 2.0 左右（控制在 3.0 以下）。 ⑶ 主要实验参数 ① 条件一。固定相： GDX 103+H 3PO4，2%(60～80 目)；色谱柱： 2m×φ 6mm；柱温： 180～ 200 ℃；气化室温度： 240 ℃；检测温度： 210 ℃；进样量：2μ L；载气流量： N 2，50mL/ min；氢气流量： 50 mL/ min ；空气流量： 600～700 mL/ min ；衰减：× 1/8 。 ② 条件二。色谱柱： 2m×φ 3mm，不锈钢柱，内填国GDX产-401 担体， 60～80 目； 柱温：210 ℃；载气：N 2，流率为 90mL/ min ；空气流率： 500 mL/ min ；氢气流率： 50 mL/ min；气化室温度： 240 ℃；检测温度： 210 ℃。 ③ 条件三。色谱柱： 2m×φ 6mm，装有2%以磷酸饱和的 60～ 80 目 GDX-103 担体； 柱温： 180～ 200 ℃；气化室温度： 240 ℃；检测温度： 210 ℃；进样量： 2μ L；载气流量： N 2，50mL/ min ；氢气流量： 50 mL/ min ；空气流量： 600～ 700 mL/ min； ④ 条件四。色谱柱： 2m×φ 2mm，玻璃柱，内装10%有的商品固定液 FluoradFC431 涂布的 Supelcoport