病理检验技术 2.脂类染色法 脂质—磷脂.pptxVIP

病理检验技术;特殊染色 ;脂质 ;(一)试剂配制 1.铬化液： 重铬酸钾? 5g、无水氯化钙 1g、蒸馏水100ml 2.酸性苏木红染液： 苏木精 50mg、碘酸钠10mg、蒸馏水49ml、冰醋酸1ml 取一清净三角烧瓶盛蒸馏水,领入苏木精和碘酸钠,慢慢稍加热溶解，待冷却后加入冰醋酸，混合均匀即可用 3.分化液： 四硼酸钠 0.25g、铁氰化钾0.25g、蒸馏水100ml;(二)染色步骤 1.小块组织固定于10%的甲醛钙中16小时(过夜)。 2.浸入铬化液于室温(约22℃)下染约18小时。 3.转入新的铬化液于60℃温箱媒染24小时。 4.流水冲洗16小时(过夜)。 5.半导体制冷切片机切片,厚8um,贴于载玻片,晾干。 6,切片再入铬化液于60℃的温箱深染1小时。 7.流水稍洗,再用蒸馏水洗。 8.切片入酸性苏木红液于37℃的温箱染5小时。 9.流水冲洗。 10.切片置入分化液于37℃处理约18小时。 11.流水冲洗10分钟,再用蒸馏水洗。 12.甘油明胶封固。;（三）结果 磷脂、神经鞘脂和核蛋白呈蓝黑色,胞质呈灰黄色。 （四）注意事项 1. 此法反应的阳性结果,必须用连续组织同时进行下述的吡啶提取法作对照(脂类均被提取而呈阴性),否则出现的阳性反应不一定是磷脂。 2. 铬化液和分化液都比较稳定,配制后用棕色小口砂塞瓶盛装于暗处保存,分化液可反复使用,直到黄色变淡才倾去。 3. 酸性苏木红液不稳定,需当天配制使用,用后不能再保存使用,不同厂牌的苏木精配成的酸性苏木红染液,其染色效果会有差异。;(五)染色机制 本法用甲醛钙固定组织,并不能把磷脂固定,而是使磷脂受钙的作用阻留不能进入固定液,其后组织用铬化剂处理,使磷脂与铬结合成不溶性的磷脂螯合铬,最后用酸性苏木红染色,苏木红与磷脂螯合铬结合生成蓝黑色的复合物。 ; (一)试剂配制 1. 稀Bouin固定液： 苦味酸饱和水溶液50ml 浓甲醛液 10ml 冰醋酸 5ml 蒸馏水 35ml 2.吡啶 35ml;（二）染色步骤 1. 与上述连续小块组织固定于稀?Bouin固定液中1天。 2. 转入70%的乙醇1小时。 3. 转入50%的乙醇30分钟。 4. 流水冲洗1小时,蒸馏水再稍洗,用滤纸吸干组织。 5. 分别浸入纯吡啶(1)、(Ⅱ)于室温各处理1小时。 6. 再转入新的吡啶于60℃的温箱处理24小时。 7. 流水冲洗2小时。 8. ???后过程按“酸性苏木红法”第2~12步骤处理。;(三)结果 磷脂因被吡啶提取而呈阴性。 (四)注意事项 吡啶抽提时组织块厚度不宜超过2mm。 (五)应用 神经组织主要由磷脂和糖脂构成,而磷脂和糖脂常共同存在,有时难以区别。用此法可以显示出磷脂,而用PAS法则可显示糖脂。