药典沉降菌检测操作作业规程.docVIP

题目：洁净区（室）沉降菌监测标准操作规程 编码： 颁发部门：质量部 起草： 日期：20XX年 月 日 修订日期： 年 月 日 审核： 日期：20XX年 月 日 生效日期：20XX年 月 日 同意： 日期：20XX年 月 日 发放份数： 版次：第1版 分发部门：质量部、中心化验室 1.目标：叙述洁净室空气中沉降菌检测操作规程，确保药品质量，预防生产环境对产品污染。 2.范围：适适用于本企业洁净区(室)沉降菌监测。 3.责任：沉降菌检测员。 4.内容： 4.1基础概念： 4.1.1菌落:细菌培养后,由一个或多个细菌繁殖而形成一细菌集落,简称CFU.通常见个数表示。 4.1.2沉降菌：用GB/T16292-20XX提及方法搜集空气中活性微生物粒子，经过专门培养基在适宜生长条件下繁殖到可见菌落数。 4.1.3沉降菌菌落数:要求时间内每个平板培养皿搜集到空气中沉降菌数目，以个/皿表示。 4.2测试原理:本测试方法利用沉降法，即经过自然沉降原理搜集在空气中生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜条件下让其繁殖到可见菌落数，以平板培养皿中菌落数来评定洁净环境内活微生物数，并以此来评定洁净区洁净度。 4.3测试方法： 4.3.1使用仪器设备和培养基: 高压消毒锅:使用时应严格根据操作规程进行。 恒温培养箱:必需定时对培养箱温度计进行检定。 培养皿:通常采取φ90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20min。 培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。 将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72 小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好培养基平皿应在2-8℃坏境中存放。 4.3.2测试时间: 对单向流，如A级净化房间内及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。 对非单向流，如B级、C级、D级以上净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟开始。 4.3.3采样点数目及其部署: 最少采样点数目:沉降菌最少采样点数可按表1确定。在满足最少测点数同时，不宜满足最少培养皿数，见表2 表1 最少采样点数目 面积（m2） 洁净度等级 A、B级 C级 D级 ＜10 2-3 2 2 ≥10-＜20 4 2 2 ≥20-＜40 8 2 2 ≥40-＜100 16 4 2 ≥100-＜200 40 10 3 注：表中面积，对于单向流洁净室，指是送风面积，对于非单向流洁净室，指是房间面积。 表2 最少培养皿数 洁净度等级 所需φ90mm培养皿数（以沉降4h计） A 14 B 2 C 2 D 2 采样点部署: 除受洁净区设备限制外，取样点应在整个洁净区均匀部署。 在日常监控时，那些和产品相邻近区域，和可能和产品直接接触空气及设备周围应考虑增加取样点和取样次数(和产品非接触区相比，这些区域应视为关键区):人员活动频繁或人员较集中区域也应视为关键区，需加强监控。 取样点一股部署在趾离地面0.8-1.0m之间或操作平台高度。 取样时，取样没备会对气流产生干扰，取样时应避免可能对气流组织干扰。 尽可能避免在回风口周围取样(距离lm以上)，且测试人员应在取样口下风侧，并尽可能少走动。 4.3.4测试步骤： 4.3.4.1采样方法: 用无菌容器(如不锈钢储槽)将预先培养培养皿(无菌平皿)带至待测区，将培养皿取出，放置在预先确定取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖上，盖后倒置。检测时记下培养皿打开起始时间和结束时间。 4.3.4.2培养： 全部采样结束，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。32℃培养，时间为72小时。 每批培养基应有对照试验，检验培养基础身是否污染，可每批选定三个培养皿做对照培养。 4.3.4.3菌落计数: 用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检验，是否有遗漏。若培养皿上有2个或2个以上菌落重合，可分辨时仍以2个或2个以上计数。 4.3.5注意事项： 测试用具要做灭菌处理，以确保测试可靠性、正确性。 采取一切方法预防人为对样本污染。 对培养基、培养条件及其它参数作具体统计。 因为细菌种类繁多，差异甚大，计数时通常见透射光于培养皿后面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长菌落，必需时用显微镜判别。 采样前应仔细检验每个培养皿质量，如发觉变质、破损或污染应剔除。 测试状态: 沉降菌测试前，被测试洁净区温湿度须达成要求要求，静压差必需控制在要求值内。