丽蚜小蜂对烟粉虱寄主选择OBP基因筛选与表达研究.pdfVIP

摘 要 丽蚜小蜂Encarsia formosa Gahan 是世界性超级害虫烟粉虱Bemisia tabaci (Gennadius) 的重要 寄生性天敌昆虫，目前已广泛应用于温室蔬菜、观赏园艺等作物粉虱类害虫的生物防治中，成为 全球害虫生物防治的典范。前期研究表明，丽蚜小蜂可以被番茄黄化曲叶病毒（TYLCV ）侵染的 番茄植株释放的挥发物β-月桂烯、β-罗勒烯、β-石竹烯和α-葎草烯等物质所吸引，并且在 TYLCV 侵染的番茄植株上，与B 型烟粉虱相比，丽蚜小蜂更喜欢选择和寄生Q 型烟粉虱，表现 出对烟粉虱不同生物型或植物感毒状态等的选择性。然而，丽蚜小蜂识别化学挥发物以及对烟粉 虱寄主选择性的嗅觉机制尚不清楚。针对这个科学问题，我们开展了以下研究工作。首先，利用 二代测序平台构建了丽蚜小蜂触角转录组数据库；其次，基于转录组数据分析，鉴定得到 39 个 气味结合蛋白（OBPs ），并对其进行了系统发育分析；最后，采用实时荧光定量（qPCR ）技术， 研究了不同组织、不同发育阶段和不同气味环境中OBPs 的转录表达水平，获得了可能参与丽蚜 小蜂识别和选择B 型和Q 型烟粉虱的候选OBP 基因。本研究结果可为阐明丽蚜小蜂OBPs 的功 能研究提供了基础，并有助于进一步研究明确和调控丽蚜小蜂对烟粉虱的寄主定位行为。 1. 丽蚜小蜂触角转录组数据库的构建及unigenes 基因功能注释 从丽蚜小蜂触角转录组中共获得66632 个unigenes ，这些unigenes 的N50 长度达1623bp，其 中11990 （18%）超过1000bp。对unigenes 进行了功能注释，共获得 19473 条（29.2% ）注释： NR 17719 条，GO 7884 条，COG 5340 条，Swiss prot 9515 条，KEGG 6634 条。与NR 数据库比 对发现，58.12%的unigenes 与丽蝇蛹集金小蜂Nasonia vitripennis 具有最高的相似度。 2. 丽蚜小蜂OBPs 基因的克隆、分类及系统发育分析 基于丽蚜小蜂转录组数据的基因注释，共鉴定得到39 条OBPs，并对其进行了多序列比对、 motif 分析和系统发育分析。发现这些OBPs 的氨基酸序列中包含4-6 个半胱氨酸位点和6 个motif 。 这些OBPs 长约400bp，分为两类，包括31 个典型OBPs 和8 个Minus-C OBPs 。 3. 气味结合蛋白基因在丽蚜小蜂中的表达 用qPCR 技术研究了39 个OBP 基因在丽蚜小蜂不同组织和不同发育时期的组织和阶段特异 性表达谱。其中，32 个OBP 基因在触角高丰度表达，2 个OBPs 基因 （OBP8、OBP33 ）在身体 部位高表达，5 个OBP 基因在触角和身体中表达量相近。此外，4 个OBPs （OBP13、OBP24、 OBP30、OBP39 ）在蛹期高表达，32 个OBPs 在成虫期 （尤其是羽化后6 小时成虫）高表达，3 个OBP 基因在各时期表达量相近。将丽蚜小蜂分别置于VQ （Q 型烟粉虱和TYLCV 共同侵染的 番茄）和VB （B 型烟粉虱和TYLCV 共同侵染的番茄）营造的气味环境中，发现有21 个OBPs 基因在VQ 与VB 两个处理之间的表达量存在显著性差异。对触角高表达OBPs、成虫期高表达 OBPs、表达量大于100 的OBPs、VQ 与VB 之间存在显著差异的OBPs 基因这四个筛选条件取交 集，得到8 个候选关键基因，分别为OBP10、OBP11、OBP21、OBP22、OBP26、OBP27、OBP29 和OBP31，推测这8 个基因可能在烟粉虱Q 型和B 型的不同选择行为中起重要作用。 关键词：丽蚜小蜂，触角转录组，气味结合蛋白，表达谱研究 I Abstract Encarsia formosa Gahan is an important parasitic natural enemy of Bemisia tabaci (Gennadius), a super pest all over the world. It has been widely u