基于单色LED的荧光显微镜装置研究与应用.pdfVIP

摘 要 荧光原位杂交技术(Fluorescence in situhybridization,FISH)是现代分子生物 学的重要检测手段，在疾病的早期诊断和精准治疗等方面具有重要的临床意义 【1】。因此精准的检测结果是实现其临床意义的重要基础。整个FISH 实验包含 预处理、杂交、镜检等主要步骤，其中镜检就需要用到荧光显微镜。荧光显微 镜作为生物信号的硬件检测设备，目前已经是生化、医学等领域必不可少的工 具之一。 通过对国内外研究情况的调研以及白细胞的FISH 检测的实验背景，本课题 以呈现准确的FISH 检测成果为目标，提出了一种基于单色LED 光源的荧光显 微镜系统设计方案，通过对LED 光源、光源驱动、图像增强算法等关键性技术 的研究与分析，确定了最终的方案。同时通过该单色LED 光源的荧光显微镜在 白细胞的FISH 检测实验中应用，得到了良好的实验效果。 本课题将通过下面三个部分完成研究与实验： 首先，通过比较LED、金卤灯、高压汞灯三者的光电特性，确定了LED 作 为荧光显微镜的单色光源的方案。根据本课题采用的白细胞FISH 实验要求，对 LED 进行了光学、电热学特性的分析，确保了选择的LED 性能完全符合设计需 要。并且光源结构的其他光学配件进行设计、分析、选型，最终共同完成光源 结构的设计。 其次，根据LED 的光通量等参数确定的符合白细胞FISH 检测实验条件下 的电压和电流，为单色LED 光源设计了相应的驱动电源，使得其可正常工作。 并将设计好的LED 光源系统和原显微镜的汞灯进行对比实验，验证了LED 光 源系统的可行性。 最后，本课题对图像增强算法进行了研究，在使用LED 单色光源通过已经 完成自动聚焦系统的荧光显微镜进行FISH 实验中，样本图像由于LED 本身的 原因导致中间亮四周暗、背景光过强看不清信号点等问题。通过微流控芯片FISH 试验后的样本，信号相对分散，根据这一特征提出了一种通过预处理分层细胞 和背景再单独对细胞信号增强的算法。并且通过MATLAB 的软件完成①彩色图 像分解通道；②删掉图片中不要的部分；③将细胞区域与背景区域分割；④填 充空洞；⑤腐蚀、膨胀；⑥对细胞背景图进行抠图操作；⑦对发光区域进行自 适应增强；⑧合并图片等步骤对样本图像进行了仿真验证，提高了运用基于LED 的荧光显微镜镜检的准确性。 关键词：荧光显微镜、FISH 检测、LED 单色光源、LED 驱动、图像增强算法 研究类型：应用研究 Abstract Fluorescence in situ hybridization (FISH), as an important detection method in molecular biology,has important clinical significance in early diagnosis and precise treatment of diseases.Therefore, accurate detection results are an important basis to realize its clinical significance.The whole FISH experiment included pretreatment, hybridization, microscopic examination and other major steps, among which microscopic examination required the use of fluorescence microscope.Fluorescence microscope is an efficient and simple observation tool and has become one of the most importanttoolsinbiomedical field. Through to the research situation at home and abroad research background and white FISH detection experiment, this topic to present accurate FISH detection results as the goal,