基于微流控芯片的FISH检测技术的研究.pdfVIP

摘 要 随着社会和工业的不断发展，一系列疾病（如白血病，又称血癌）的发病率不断激 增。其中白血病分为多种类型，不同类型对应不同的治疗方式。因此，在黄金时间内对 患者病型进行准确的判定与分型，对于病情的有效治疗尤为重要。 目前，荧光原位杂交技术（Fluorescence In Situ Hybridization ，FISH ）在白血病的检 测与分型方面的应用已取得一定成效，并广泛应用于血液肿瘤诊断、实体肿瘤诊断、产 前诊断等领域。但是，国内FISH 检测技术的应用面临一些瓶颈，主要有出检速度慢、 检测成本高、自动化设备缺乏等，严重限制了FISH 检测技术在精准检测领域的推广与 应用。 微流控芯片具有体积小、通量高、反应快速、易于集成和自动化等优点，作为核心 器件来构建FISH 检测系统是解决FISH 检测技术现有缺陷(流程繁琐、检测耗时过长、 昂贵试剂消耗过多、检测通量不足等)最理想的选择。因此，设计出一款能够与FISH 检 测系统相适配的微流控芯片是当前应用研究的重大课题。基于FISH 检测技术和检测流 程，本论文作出如下研究： (1) 了解FISH 检测技术的发展现状与趋势，并分析FISH 检测技术在应用领域，尤其 是应用于白血病的判定和分型方面存在的问题； (2) 完成基于嵌入式斜坡刻蚀装置的设计与搭建，包括主控电路的设计，程序设计和 编写以及刻蚀夹具的设计，实现斜坡芯片刻蚀过程的自动化； (3) 分析目前现有设备的优缺点，结合FISH 检测系统的设计需求，完成基于斜坡结 构FISH 芯片的设计与优化，并完成预实验平台的设计和搭建； (4) 根据基于斜坡结构FISH 芯片存在的缺陷完成基于微坝阵列结构FISH 芯片的设计 与研究，包括芯片结构的设计与优化，工艺路线的制定，制作方法和材料的选择， 关键工艺参数的优化，确定最佳标本处理方式，并完成芯片测试； (5) 分析全自动FISH 检测系统的工作流程设计并搭建半自动FISH 检测系统，完成芯 片FISH 检测实验验证，并对实验结果进行分析总结，最后提出总结和展望。 本论文中所设计的芯片在满足FISH 检测系统设备的需求的同时解决了上述FISH 检 测技术在实际应用中存在的主要问题，并具有以下创新点： (1) 检测效率高，单片芯片可同时检测四组标本，检测时长缩短至六分之一； (2) 封闭式微量反应腔； (3) 检测成本低，试剂用量少，尤其是昂贵探针的用量，降低至四分之一； (4) 物理方法实现目标细胞的分离与捕获。 关键词：微流控芯片；全自动 FISH 检测系统；荧光原位杂交（FISH ）；白细胞；FISH 检测 研究类型：应用研究 Abstract With the continuous development of society and industry, the incidence of a series of diseases (such as leukemia, also known as blood cancer) has continued to increase. Leukemia is divided into many types, and different types correspond to different treatment methods. Therefore, accurate determination and classification of the patients disease type in prime time is particularly important for effective treatment of the condition. At present, the application of Fluorescence In Situ Hybridization (FISH) in the detection and typing of leukemia has achieved certain results and FISH is widely used in the fields of b