外源基因表达与基因工程药物.pptVIP

外源基因表达与 基因工程药物 ;2005年全世界约有糖尿病患者1.8亿,我国约6000万。 治疗糖尿病特效药——胰岛素。 每100kg 猪或牛的胰腺中仅可提取4~~5g。;基因工程方法生产蛋白质药物的优势是非常明显的;胰岛素 人生长激素 干扰素 白细胞介素2 粒细胞集落刺激因子 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 红细胞生成素 EPO 组织纤溶酶原激活剂 生长激素 促生长素 抗血友病因子Ⅷ 脱氧核糖核酸酶 葡糖脑苷脂酶 鼠单克隆抗体 ;基因工程的产物：;DNA(基因)　　　mRNA 蛋白质(性状);基因表达;学习要求;指在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体（宿主）细胞内使之持续稳定繁殖，目的基因扩增、表达，获得人类所需的产品的工程。;外源基因表达基本类型; ;外源基因表达（基因工程）的基本过程：; 基因工程的重大意义1) 重组DNA技术填平了生物种属间不可逾越的鸿沟。 跨越天然物种屏障，将原核和真核生物、植物和动物，造福人类，在过去人们难以置信的事情，现在已成为现实。;（2）利用重组DNA技术可以在体外大量扩增、纯化人们感兴趣的基因，研究其结构、功能及调控机制，从而拓宽了分子生物学的研究领域。 ;（3）医学上应用更为广泛，涉及各领域正常人类生命活动的分子机制；人类各种疾病发生的分子机理；人类各种疾病如遗传性疾病、肿瘤、肥胖、心血管疾病、传染病等病因的 查明、诊断、治疗和预防。药物的研发和生产；疾病模型的建立；人类的营养、健康、长寿和保健（亚健康）; 本章节的地位：; 分子遗传学理论上的六大进展解决了 生命现象的遗传物质基础（均是核酸） 结构模型（同类构件、双螺旋） 复制方式（相似的机制） 遗传信息流动方向（共同的中心法则） 遗传密码（共用一套相同的密码） 表达和调控的机理（类同的方法） 基因突变机理、意义（变异与进化） 为基因工程技术的诞生典定了理论基础。 理论上的可行性。 ;科技探索之路：;科技探索之路：;科技探索之路：;科技探索之路：;科技探索之路：;科??探索之路：;科技探索之路：;二、分子遗传学新方法是 基因工程的技术基础 首当其冲的是要解决： ① 如何自如地得到目的基因； ② 如何在体外改造基因，得到重 组体； ③ 在体外转移重组基因； 直到20世纪70年代中期，相继出现了 几项关键性技术，梦想成真。; ;一把特殊的剪刀—限制性内切酶的发现阿尔伯(Arber)、史密斯(Smith)和内森斯(Nathans)，获1978年诺贝尔生理学和医学奖;限制性核酸内切酶(restriction endonuclease, RE);限制酶（Ⅱ型）;限制性内切酶能识别特定的碱基序列;限制性核酸内切酶;2.同裂酶(异源同工酶)：凡来源不同但识别和切割同样的核苷酸序列的限制性酶。 3.同尾酶：来源、识别顺序、切割方式不同，但所生成的限制性片段是相同的粘性末端;限制酶切出的末端;作用特点——断开磷酸二酯键; 作用特点——断开磷酸二酯键;限制性内切酶造成粘性末端 有利于重组DNA 分子的构建;“分子缝合针” —— DNA连接酶;1.E·coli DNA连接酶或T4DNA连接酶;2.T4DNA连接酶;3.连接酶类型总结;比较：DNA连接酶与DNA聚合酶;DNA限制酶和连接酶的发现使基因工程从理论走向了实验室;; 大多数的DNA片段不具备自我复制能力，为了能够在寄主细胞中进行繁殖，就必须将DNA片段连接到一种具有自我复制能力的DNA分子上，这种DNA 分子就是载体。;载 体（Vector）;作为载体的条件 ;;大肠杆菌的质粒载体;返回;λ噬菌体;用噬菌体DNA构建重组DNA分子;㈠克隆载体;分类：质粒、噬菌体、黏性质粒、M13噬菌体、酵母载体、真核细胞病毒载体;（二）表达载体;item;宿主（host）; 1972年，美国斯坦福大学Berg博士领导的一个研究小组，率先完成了世界上第一次成功的DNA体外重组实验，基因工程从此诞生。; ;基因工程的主要步骤;1.目的基因制备和常用分离方法;目的基因的获得;PCR扩增技术;“I do my best thinking while driving”; 聚合酶链式反应:利用酶促反应在体外大量、特异性扩增DNA片段。把寻找目的基因和扩增目的基因两步操作并成一步。;three steps:;5?;25～30 次循环后，模板DNA的含量可以扩大100万倍以上。;3. 外源DNA片断导入受体（宿主）细胞; 重组DNA导入大肠杆菌细胞